Caracterização da fenoloxidase de Apis mellifera: controle hormonal (2000)
- Authors:
- Autor USP: ZUFELATO, MARIA SALETE - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 592
- Assunto: BIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: A melanização da cuticula de Apis mellïfera tem inicio na metade do periodo pupal quando o titulo de ecdisteróides na hemolinfa está em declinio. Durante todo este período, o titulo de hormônio juvenil é basal, e o inicio da pigmentação requer a atividade da fenoloxidase (PO), uma enzima da cadeia de reações clue leva àsintese de melanina. A PO origina-se por clivagem de uma proteina precursora inativa - a profenoloxidase - e exerce função essencial no processo de pigmentação cuticular. G objetivo central deste trabalho consistiu no estudo ïn vivo e in vitro da regulação da melanização cuticular por 20-hídroxiecdisona (20-E) a por hormônio juvenil. Pupas de Apïs mellifera foram tratadas corn 20-E ou corn um análogo de hormônio juvenil, ,yrr`prrxy'en (PPN) e o inicio a progresso da pigmentação cuticular foram estudados A atividade da PO foi estimada em extratos totais e na hemolínfa de pupas tratadas ou não corn 20-E, e esta enzima foi caracterizada por eletroforese em poliacrilamida desnaturante e não-desnaturante. As melhores condiçóes de pH e temperatura para a atividade da PO foram determinadas, assim como o Km, utilizando L-Dopa como substrato. Radioimunoensaio foi utilizado para dosagem de ecdisteróides da hemolinfa de pupas tratadas corn PPN corn o objetivo de estudar a interação entre estes hormônios. Anticorpo anti-PO foi produzido para caracterização das fenoloxidases da hemolinfa e da cuticula por Western blots Os resultados mostram que PPNantecipa a deposição de pigmentos na cutícula e intensifca este processo, 20E retarda o inicio da pigmentação e, dependendo da dose, pode inibí-la completamente. A resposta aos hormônios é dosedependente e há diferença de susceptibilidade entre as fases pupais estudadas. A ação de PPN decorre de sua interação corn 20-E, pois radioimunoensaios mostraram que o tratamento corn PPN retarda o aumento de ecdisteróides na hemolinfa pupal, permitindo assim a iniciação ) precoce da pigmentação. As dosagens de fenoloxidase nas pupas permitiram determinar que o pH ótimo de atividade desta enzima é 7,0 e a temperatura ótima, após 10 minutos de reação, é 30°C. O Km, utilizando L-Dopa como substrato, é 1,0 mM As eletroforeses realizadas em condições nãodesnaturantes permitiram a caracterização de três isoformas de fenoloxidase, denominadas POI, PO2 a P03 A POI, formada por subunidades de, aproximadamente, 68 kDa, está presente na hemolinfa de todas as fases pupais. PO2 e P03 surgem na epiderme de pupas prestes a pigmentar, na metade do período pupal, quando o título de ecdisteróides está em declínio. Os Western blots permitiram detectar, tanto na hemolinfa quanto no tegumento, além da POI, duas outras isoformas que foram denominadas POI. a POIb e cuja origem pode ser atribuída à oxidação da isoforma original, POI. Provavelmente, POI é a isoforma que tem função na resposta imune, protegendo o organismo contra agentes agressores e as enzimas do tegumento, P02 a P03,participam da cadeia de reações que leva à síntese de melanina e conseqüente pigmentação
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2000
- Data da defesa: 07.06.2000
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ABNT
ZUFELATO, Maria Salete. Caracterização da fenoloxidase de Apis mellifera: controle hormonal. 2000. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2000. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Zufelato, M. S. (2000). Caracterização da fenoloxidase de Apis mellifera: controle hormonal (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Zufelato MS. Caracterização da fenoloxidase de Apis mellifera: controle hormonal. 2000 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Zufelato MS. Caracterização da fenoloxidase de Apis mellifera: controle hormonal. 2000 ;[citado 2024 abr. 24 ]
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