Sistema peroxidase tripanotiona-dependente em Trypanosoma cruzi (2000)
- Authors:
- Autor USP: RODRÍGUEZ, JORGE ALBERTO LÓPEZ - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: DOENÇA DE CHAGAS; TRYPANOSOMA; BIOLOGIA MOLECULAR
- Language: Português
- Abstract: Trypanosoma cruzi, causador da tripanossomíase americana, é um microrganismo exposto a uma variedade de espécies reativas de oxigênio, geradas como conseqüência do metabolismo de drogas tripanocidas, ou pelo hospedeiro como resposta fisiológica à invasão, além daqueles produzidos internamente em conseqüência dos processos oxidativos do parasita. Em qualquer circunstância, as células precisam proteger-se contra os produtos da redução parcial do oxigênio. Os tripanassomatídeas são aparentemente deficientes na defesa antioxidante. Embora possuindo uma superóxido dismutase, carecem de glutationa peroxidase e catalase, que são necessárias para a remoção do peróxida de hidrogênio. Além disso, glutationa, o maior composto sulfidrílico antioxidante em células de mamíferos, está presente em baixas concentrações nos tripanossamatídeos. No seu lugar, têm um composto 'sui generis', um conjugado de glutationa e de espermidina, conhecido como tripanotiona (Nl,N8-bis(glutationil)espermidina), o qual junto com a tripanotiona redutase e o sistema peroxidase tripanotiona-dependente, parece estar envolvida no mecanismo de defesa antioxidante em Crithídía fasciculata. Este sistema parece existir em outros tripanossomatídeos, representando um importante alvo quimioterápico. A existência deste sistema metabólico em T. cruzi foi demonstrada inicialmente por uma baixa atividade peroxidásica tripanationa-dependente, detectada em extratos celulares deformas epimastigotas e tripamastigotas. Imunaquimicamente, a existência deste sistema foi evidenciada ao se usar anticorpos heterólogos contra triparredoxina (Cfl6) e triparredoxina peroxidase (Cf21) de C. fasciculata. Enquanto a reatividade emepimastigotas de T. cruzi é homogeneamente distribuída no citoplasma, as formas tripomastigotas apresentam uma reatividade descontínua localizada próxima à membrana plasmática. Os mesmos anticorpos paliclonais foram utilizados para identificar por ) Western blot, as proteínas correspondentes em T. cruzi, sendo reconhecidas duas proteínas com massas moleculares aparente de 16 e 21 kDa, Tcl6 e Tc21, respectivamente. Oliganucleotídeos foram então sintetizados baseados em regiões conservadas de seqüências codantes de DNA de peroxirredoxinas de tripanossomatídeos e de outros organismos e utilizados em ensaios de PCR com CDNA, amplificando-se um produto de 525 pb. Esta seqüência parcial apresentou uma homologia de 75% com o gene da triparredoxina peroxidase de C. fasciculata. No mesmo período foi depositada no GenBank (acc. no. AJ012101) uma seqüência codante para uma proteína do tipo peroxirredoxina em T. cruzi e que apresentou uma homologia de 100% em relação à seqüência (correspondente às -posições 1 a 525 de Acc. Nr. AJO12101). Utilizando a seqüência publicada, novos aligonucleotídeos correspondentes às regiões 5' e 3' foram desenhados, o gene putativo da triparredoxina peroxidase em T. cruzi (Tc21) foi amplificadoa partir de ONA de T. cruzi por PCR, o produto cionado no vetor pET21b(+) e expresso em E. coli B121(DE3). A proteína obtida apresentou atividade de tripanotiona peroxidase. Esta enzima, a triparredoxina peroxidase é membro de uma família de proteínas antioxidantes, denominadas de peroxirredoxinas, que são caracterizadas pela presença de dois domínios conservados - VCP, contendo as cisteínas envolvidas na catálise. Em relação à triparredoxina, apesar das váriastentativas empreendidas, o isolamento do respectivo gene foi infrutífero. No entanto, sua existência foi demonstrada por Western blot e imunofluorescência usando-se o anticorpo contra a triparredoxina de C. fasciculata. A triparredoxina de C.fasciculata é um membro da super-família das tiorredoxinas, com uma massa molecular de 16 kDa, maior que a tiorredoxina em vertebrados. Embora possuindo o motivo WCPPCR próximo à extremidade N-terminal, o qual é similar ao motivo ) WCGPCK(R), típico do sítio ativo das tiorredoxinas, a triparredoxina mostra uma baixa identidade em relação a estas últimas. A demonstração da existência de triparredoxina, triparredoxina peroxidase e tripanationa redutase em T.cruzi sugere similaridade com o sistema de peroxidase descrito em C. fasciculata e que a defesa antioxidante em T. cruzi envolve um sistema enzimático mediado por tripanotiona e dependente de NADPH. As evidências disponíveis confirmam a existência do sistema peroxidase tripanationa-dependente em T.cruzi, contrariando a afirmativa prévia da literatura que considerava a redução de peróxidos como uma reação não-enzimática. Esses resultados abrem a perspectiva de utilização do sistema como um potencial alvo para o desenvolvimento de quimioterápicos
- Imprenta:
- Data da defesa: 20.06.2000
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ABNT
RODRIGUEZ, Jorge Alberto Lopez. Sistema peroxidase tripanotiona-dependente em Trypanosoma cruzi. 2000. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2000. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-07062019-101241/. Acesso em: 03 maio 2024. -
APA
Rodriguez, J. A. L. (2000). Sistema peroxidase tripanotiona-dependente em Trypanosoma cruzi (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-07062019-101241/ -
NLM
Rodriguez JAL. Sistema peroxidase tripanotiona-dependente em Trypanosoma cruzi [Internet]. 2000 ;[citado 2024 maio 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-07062019-101241/ -
Vancouver
Rodriguez JAL. Sistema peroxidase tripanotiona-dependente em Trypanosoma cruzi [Internet]. 2000 ;[citado 2024 maio 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-07062019-101241/
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