Determinação espectrofotométrica da atividade da ATPase de S-conjugados de glutamina (bomba gs-x/mpr) em membranas de células isoladas (2000)
- Authors:
- Autor USP: CURI, RUI - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: O transporte vetorial através da ATPase de extrusão de S- conjugados de glutationa (bomba GS-X/MRP) pode ser avaliado com a utilização de vesículas inside-out produzidas a partir de membranas plasmáticas das células em estudo. Entretanto, não existem medidas diretas para a determinação da atividade desta ATPase. Neste trabalho, desenvolvemos uma técnica rápida online para a determinação da atividade da bomba GS-X/MRP baseada na hidrólise de ATP associada ao transporte de S-conjugados de glutationa.Métodos e Resultados: Linfócitos normais e de ratos portadores do tumor de Walker 256 (TW256), células do TW256 e hepatócitos de rato foram homogeneizados em tampão fosfato e as membranas plasmáticas preparadas por ultracentrifugação e dissolução em tampão Tris-lubrol. A atividade GS-X/MRP foi avaliada espectrofotometricamente a 340 nm através do consumo de NADH acoplado à hidrólise de ATP na presença de fosfoenolpiruvato, piruvato quinase e lactato desidrogenase. Observou-se uma atividade de 205 ± 38 nmol/min/mg proteína para os hepatócitos utilizando-se 2,4- dinitrofenil-S-glutationa (100 ?M) como substrato e 144,5 ± 21,7 nmol/min/mg proteína utilizando-se dissulfeto de glutationa (GSSG) a 2 mM como substrato. As membranas do TW256 mostraram uma atividade de 3,25 ± 0,48 ?mol/min/mg proteína com GSSG como substrato. Conclusões: Os resultados obtidos são compatíveis com aqueles observados em experimentos com vesículas inside-out econfirmam a existência de atividade da bomba GS-X em células TW256 desproporcionalmente maior que aquela observada em linfócitos dos mesmos animais
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- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental
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ABNT
KOLBERG, A et al. Determinação espectrofotométrica da atividade da ATPase de S-conjugados de glutamina (bomba gs-x/mpr) em membranas de células isoladas. 2000, Anais.. São Paulo: FESBE, 2000. . Acesso em: 03 jun. 2024. -
APA
Kolberg, A., Rosa, T. G., Senna, S. M., Curi, R., & Homem de Bittencourt Jr., P. I. (2000). Determinação espectrofotométrica da atividade da ATPase de S-conjugados de glutamina (bomba gs-x/mpr) em membranas de células isoladas. In Resumos. São Paulo: FESBE. -
NLM
Kolberg A, Rosa TG, Senna SM, Curi R, Homem de Bittencourt Jr. PI. Determinação espectrofotométrica da atividade da ATPase de S-conjugados de glutamina (bomba gs-x/mpr) em membranas de células isoladas. Resumos. 2000 ;[citado 2024 jun. 03 ] -
Vancouver
Kolberg A, Rosa TG, Senna SM, Curi R, Homem de Bittencourt Jr. PI. Determinação espectrofotométrica da atividade da ATPase de S-conjugados de glutamina (bomba gs-x/mpr) em membranas de células isoladas. Resumos. 2000 ;[citado 2024 jun. 03 ] - Toxicidade de ácidos graxos em células produtoras de insulina HIT-T15
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