Otimização quimiométrica da separação de DNA em solução polimérica por eletroforese capilar com fluorescência induzida a laser para análises genéticas (2001)
- Authors:
- Autor USP: CATAI, JONATAN RICARDO - IQSC
- Unidade: IQSC
- Subjects: PROCESSOS DE SEPARAÇÃO; MACROMOLÉCULA
- Language: Português
- Abstract: Durante a década de 90, a eletroforese capilar se consolidou como uma poderosa ferramenta para a análise de DNA e muito outros biocompostos. Especialmente para o DNA, muitos trabalhos tem sido publicados visando as melhores condições de separação, porém a metodologia utilizada para isso foi a univariada a qual nem sempre atinge o ponto de ótimo. Com otimização univariadas há grande chance de que as separações produzidas por este método possam ser melhoradas. Isto pode ser conseguido utilizando-se um método multivariado, onde todas as variáveis são alteradas ao mesmo tempo. Um desses métodos é o do simplex modificado, o qual é um método de operação evolucionária, onde cada condição de experimentação constitui um vértice de uma figura geométrica com k+1 vértices (k é no número de variáveis) e que progride de forma a buscar o ponto de máximo (ou mínimo) de uma superfície de resposta. Tendo-se em vista que o principal objetivo de uma análise de DNA é determinar o tamanho de cada fragmento, o método de separação deve produzir resultados com alta resolução e serem lineares por uma ampla faixa de tamanho. Para o caso da análise de fragmentos de DNA produzidos através das reações RAPD (Random Amplified Polymorphisms DNA) a faixa de linearidade deve estar entre 50 e 4000 pares de base. Neste trabalho, utilizando-se de métodos quimiométricos, mais propriamente do método do simplex modificado, 6 variáveis com influência direta na resolução e linearidade foram otimizadas.) São elas, o tempo de injeção da amostra, campo elétrico de injeção, concentração de tampão na amostra, temperatura da separação, campo elétrico da separação e concentração da solução polimérica. O objetivo foi maximizar o coeficiente de correlação (R) entre os pontos e a equação da reta de um gráfico de log mobilidade contra log do número de pares de base (pb) provenientes da separação dos fragmentos entre 75 e 4072 pb, visando a aplicação do método em análises genéticas. O método quimiométrico provou ser muito eficiente, pois com apenas 38 experimentos o ponto de ótimo foi atingido. Embora 3 vértices (condições experimentais) tenham apresentado R > 0,98, optou-se por aquela condição que apresentou uma maior resolução dos picos e menor viscosidade da solução polimérica, o que facilitou sua introdução no capilar. Além disso, nessa condição, observou-se que para uma faixa de tamanho mais restrita, entre 201 e 2036 pb, R aumentou para 0,99. Então, várias análises foram feitas utilizando-se esta condição para determinar a repetibilidade do método, a qual foi de 0,991 '+ OU -' 0,001
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2001
- Data da defesa: 22.06.2001
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ABNT
CATAI, Jonatan Ricardo. Otimização quimiométrica da separação de DNA em solução polimérica por eletroforese capilar com fluorescência induzida a laser para análises genéticas. 2001. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2001. . Acesso em: 11 maio 2024. -
APA
Catai, J. R. (2001). Otimização quimiométrica da separação de DNA em solução polimérica por eletroforese capilar com fluorescência induzida a laser para análises genéticas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. -
NLM
Catai JR. Otimização quimiométrica da separação de DNA em solução polimérica por eletroforese capilar com fluorescência induzida a laser para análises genéticas. 2001 ;[citado 2024 maio 11 ] -
Vancouver
Catai JR. Otimização quimiométrica da separação de DNA em solução polimérica por eletroforese capilar com fluorescência induzida a laser para análises genéticas. 2001 ;[citado 2024 maio 11 ]
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