Isolamento e caracterização genética de determinantes genéticos envolvidos na resistência múltipla a drogas em Aspergillus nidulans (2001)
- Authors:
- Autor USP: SOUZA, CRISTIANE COQUEJO DE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: ASPERGILLUS; RESISTÊNCIA MICROBIANA ÀS DROGAS; GENÉTICA MICROBIANA
- Language: Português
- Abstract: Aspergillus nidulans é um fungo filamentoso não patogênico, que possui um sistema genético bem caracterizado, sendo assim um sistema modelo para o estudo de diferentes aspectos de resistência a drogas. Como um passo preliminar para a caracterização de genes que conferem resistência múltipla a drogas, nós isolamos quinze mutantes sensíveis a cicloheximida (scy), sendo que seis deles mostraram um fenótipo complexo de resistência e/ou sensibilidade a diferentes drogas e/ou condições de estresse. O isolamento destes mutantes visa a identificação de genes cujos produtos são importantes na resistência a drogas, através da análise de mutações que alteram o "status" de resistência/sensibilidade da célula. Visando verificar quantos grupos de complementação estariam realmente envolvidos, estes mutantes foram cruzados, e verificou-se a existência de seis diferentes grupos de complementação responsáveis pela sensibilidade observada. Um destes mutantes, o scy465, mostrou possuir um fenótipo complexo de sensibilidade a drogas e agentes de estresse, tais como cicloheximida, higromicina, tetraciclina, osmolaridade, pH baixo e t-butilhidroperóxido. Este mutante foi analisado ao nível celular, mostrando possuir um defeito vacuolar. Como uma forma alternativa para o isolamento de mutantes com sensibilidade múltipla a drogas, nós também utilizamos um plasmídeo para transformar o fungo Aspergillus nidulans na presença da enzima BamHI, técnica esta denominada de REMI (IntegraçãoMediada por um Enzima de Restrição). Com esta abordagem, nós esperávamos identificar genes cujos produtos são importantes para a resistência a drogas através da análise de gene rompidos que podem alterar a sensibilidade à drogas. Foram isolados em torno de 1300 transformantes ) que foram submetidos a diferentes drogas e condições de estresse. Setenta e sete deles mostraram sensibilidade a pelo menos uma droga, enquanto que quatorze transformantes mostraram um complexo fenótipo de sensibilidade a diferentes drogas e em cinco deles, estas marcas cosegregavam. Cruzamentos genéticos entre os transformantes REMI, os mutantes scy e mutantes resistentes a imazali (ima) foram realizados, com o objetivo de determinar se estas mutações seriam alélicas. Observou-se que o gene imaD que confere resistência a imazalil, pode estar envolvido na sensibilidade a higromicina e a cicloheximida, uma vez que esta mutação é alélica ao mutante scy290. Além disso, o cruzamento feito entre o transformante 8223 e o mutante ima535, mostrou que ambas as mutações estão no mesmo grupo de complementação sugerindo que o gene imaG pode estar envolvido na sensibilidade a cicloheximida e itraconazole
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2001
- Data da defesa: 31.05.2001
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ABNT
SOUZA, Cristiane Coquejo de. Isolamento e caracterização genética de determinantes genéticos envolvidos na resistência múltipla a drogas em Aspergillus nidulans. 2001. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2001. . Acesso em: 16 maio 2024. -
APA
Souza, C. C. de. (2001). Isolamento e caracterização genética de determinantes genéticos envolvidos na resistência múltipla a drogas em Aspergillus nidulans (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Souza CC de. Isolamento e caracterização genética de determinantes genéticos envolvidos na resistência múltipla a drogas em Aspergillus nidulans. 2001 ;[citado 2024 maio 16 ] -
Vancouver
Souza CC de. Isolamento e caracterização genética de determinantes genéticos envolvidos na resistência múltipla a drogas em Aspergillus nidulans. 2001 ;[citado 2024 maio 16 ]
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