Transferência do gene atacina a para plantas de maracuja amarelo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) por biobalistica (2002)
- Authors:
- Autor USP: TAKAHASHI, ELIZABETE KEIKO - ESALQ
- Unidade: ESALQ
- Sigla do Departamento: LGN
- Subjects: BACTERIOSE VEGETAL; BIOLÍSTICA; MARACUJÁ; RESISTÊNCIA GENÉTICA VEGETAL; TRANSFERÊNCIA DE GENES
- Language: Português
- Abstract: O Brasil é o principal produtor de maracujá amarelo. Entretanto, a produtividade é baixa, cerca de 10.000 t por hectare. A produção de frutos varia com o cultivar, condições climáticas, manejo e outros fatores, principalmente doenças causadas por bactérias e vírus. Metodologias de transformação genética são alternativas modernas para obter plantas resistentes. A proteína derivada de inseto, atacina A atua como bactericida, e tem sido utilizada para conferir resistência a espécies vegetais. Os objetivos do presente estudo foram (i) obter a regeneração de brotos in vitro, (ii) testar a eficiência de agentes seletivos durante o processo organogênico, (iii) construir o cassete contendo o gene atacina A, e (iv) determinar as condições físicas e biológicas para a transformação genética de plantas de maracujá amarelo utilizando o método de biobalística. Em relação a estudos in vitro, três recipientes de cultura foram avaliados como também diferentes concentrações de benzylaminopurina (BA) e água de coco que foram adicionadas ao meio basal. Phytagel e agar também foram testados como agentes solidificantes. As culturas foram avaliadas quanto à resposta morfogênica dos discos foliares. O gene atacina A foi sequenciado e clonado para receber o promotor CaMV 35S com um enhancer duplicado e o terminador 35S. Este vetor foi denominado pFFatacina. O cassete de expressão foi clonado nos vetores pCambia 1300 e pCambia 2300 que contêm os genes higromicina (hpt) e canamicina (nptII),respectivamente. Discos foliares, assim como segmentos entrenodais e hipocotiledonares que induzem calos, foram usados nos experimentos de biobalística. A expressão do gene uidA foi avaliada para testar os parâmetros de bombardeamento, pressão de gás Hélio (psi) e a distância da tela de retenção até o tecido alvo (cm). A resposta organogênica dos discos foliares não diferiu quando placas de petri, tubos ou frascos foram usados, embora os tubos ) (2,4 x 8,5 cm, 30 ml) mostraram uma resposta ligeiramente melhor. O meio MS (Murashige & Skoog, Physiologia Plantarum, 15, 1962) solidificado com agar (0,6%) e suplementado com 0,5 mg/L BA e 5% de água de coco (w/v) provou ser eficiente na indução de organgênese. Brotos foram obtidos após 30 dias. Segmentos entrenodais e hipocotiledonares produziram 300 estruturas semelhantes a gemas por explante. Microscopia de varredura e análises histológicas demonstraram ser estruturas foliares, as quais evoluíram em brotos após 50 dias em ½ MS. Higromicina a 5 mg/L provou ser um agente seletivo apropriado, inibindo organogênese em 60% dos explantes. Canamicina a 50 mg/L foi também efetiva. Calos morfogênicos de até 10 dias e discos foliares de 3 dias de cultivo mostraram elevados níveis de expressão transiente sob 800/6,5 ou 1000/9,5 (psi de gás Hélio/cm de distância de vôo dos microprojéteis). Foram realizados experimentos de co-transformação com pBI426 (8,7 kb) que contém o gene nptII e pFFatacina (5,25 kb), como também utilizando-seum único vetor (pCatacina 1300). Freqüência de transformação estável de 0,85% foi obtida. A integração do transgene foi confirmada por PCR para o gene atacina A. Este é o primeiro trabalho que relata a transferência de um gene de interesse para plantas de maracujá amarelo por biobalística
- Imprenta:
- Publisher place: Piracicaba
- Date published: 2002
- Data da defesa: 29.08.2002
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ABNT
TAKAHASHI, Elizabete Keiko. Transferência do gene atacina a para plantas de maracuja amarelo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) por biobalistica. 2002. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2002. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-03122002-083637/. Acesso em: 01 jun. 2024. -
APA
Takahashi, E. K. (2002). Transferência do gene atacina a para plantas de maracuja amarelo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) por biobalistica (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-03122002-083637/ -
NLM
Takahashi EK. Transferência do gene atacina a para plantas de maracuja amarelo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) por biobalistica [Internet]. 2002 ;[citado 2024 jun. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-03122002-083637/ -
Vancouver
Takahashi EK. Transferência do gene atacina a para plantas de maracuja amarelo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) por biobalistica [Internet]. 2002 ;[citado 2024 jun. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-03122002-083637/
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