Enzima conversora de endotelina: clonagem, expressão e purificação (2003)
- Authors:
- USP affiliated authors: KIMURA, EDNA TERUKO - ICB ; FERRO, EMER SUAVINHO - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: HISTOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: A enzima conversora de endotelina (ECE1; EC 3.4.24.71) é uma endopeptidase da família da neprilisinas, que se caracterizam por serem proteínas integrais de membrana e por possuírem um motif típico conservado HExxH de metalopeptidases. A importância farmacológica da ECE1 esta principalmente na propriedade de converter o precursor big-endotelina no peptídeo vasoconstrictor endotelina, formado por 21 aminoácidos e produzido por células do endotélio vascular. Portanto, esse membro da família da neprilisina é um alvo terapêutico importante, por exemplo, por participarem de desordens fisiológicas nos sistemas cardiovascular e inflamatório. Inibidores potentes e seletivos da ECE1 poderão contribuir para um melhor entendimento das funções dessa enzima. O objetivo do presente trabalho é clonar, expressar e purificar a ECE1 em larga escala para determinação de sua estrutura cristalográfica.O cDNA que codifica o domínio catalítico da ECE1 de leito vascular de ratos foi amplificado por rt-PCR com base nas seqüências de DNA depositadas no GeneBank, e posteriormente subclonado em vetor plasmidial de transferência pBSV-8His para expressão da proteína correspondente. A construção pBSV-8His-ECE1 e o DNA do baculovírus BaculoGOLD (Pharmigen) foram co-transfectados em células de inseto Sf9 em cultura de células em suspensão. A proteína recombinante expressa foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de níquel, e submetida adesglicosilação enzimática, a western blotting contra o anticorpo anti-His tag e ao espectro de absorção de dicroísmo circular. Esses resultados indicaram a expressão da enzima em sua forma madura, com modificações pós-traducionais e estrutura secundária onde predominam alfa-helices. Esses resultados demonstram a habilidade da metodologia utilizada para clonar e expressar a ECE1 recombinante. Assim, experimentos adicionais estão sendo conduzidos com o objetivo de expressar e purificar a ECE1 em larga escala para determinação de sua estrutura cristalográfica
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Pesquisa do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2003
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV
-
ABNT
GARRIDO, Paula Amaral Gurgel et al. Enzima conversora de endotelina: clonagem, expressão e purificação. 2003, Anais.. São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP, 2003. . Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Garrido, P. A. G., Kimura, E. T., Ferro, E. S., Baia, G. S., Kobarg, J., & Shida, C. S. (2003). Enzima conversora de endotelina: clonagem, expressão e purificação. In Resumos. São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP. -
NLM
Garrido PAG, Kimura ET, Ferro ES, Baia GS, Kobarg J, Shida CS. Enzima conversora de endotelina: clonagem, expressão e purificação. Resumos. 2003 ;[citado 2024 maio 21 ] -
Vancouver
Garrido PAG, Kimura ET, Ferro ES, Baia GS, Kobarg J, Shida CS. Enzima conversora de endotelina: clonagem, expressão e purificação. Resumos. 2003 ;[citado 2024 maio 21 ] - Cristallization and preliminary diffraction studies of EC 3.4.26.16 (neurolysin EP 24.16) and dynorphin A 1-13 complex
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