Efeito bactericida de fosfolipases A2-Lys49: o papel da C-terminal na atividade de Bothropstoxina-l em membranas biológicas e artificiais (2005)
- Authors:
- Autor USP: ARAGÃO, ELISÂNGELA APARECIDA - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: MACROMOLÉCULA (QUÍMICA); QUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: As fosfolipases 'A IND. 2' (EC 3.1.1.4) catalisam a hidrólise das ligações ácido-éster na posição sn-2 de glicerofosfolipídios liberando, como produto da catálise, ácidos graxos e lisofosfolipídios. Membros da sub-família de fosfolipases 'A IND. 2'-Lisina49 ('PLA IND. 2'-Lys49), isolados de venenos de serpentes Viperidae mostram uma substituição do resíduo de aspartato na posição 49 por uma lisina, com a eliminação concomitante da atividade hidrolítica contra fosfolipídeos. Apesar da ausência de atividade catalítica, as 'PLA IND. 2'-Lys49 apresentam propriedades farmacológicas variadas incluindo miotoxicidade, e danifica membranas artificiais por um mecanismo 'Ca POT. 2+'-independente, que não envolve hidrólise de fosfolipídeos. As 'PLA IND. 2'-Lys49 formam homodímeros em solução, e estudos cristalográficos e espectroscópicos de Bothropstoxina-l, uma 'PLA IND. 2'-Lys49 do veneno de Bothropsjararacussu, revelaram que a transição na estrutura quaternária do dímero provoca a mudança de posição da região C-terminal, apoiando a sugestão do envolvimento desta região no modelo proposto de danificação da membrana 'Ca POT. 2+'-independente. Um papel para a região C-terminal das 'PLA IND. 2'-Lys49 também foi sugerido na atividade bactericida observada para esta proteína, e o presente estudo investiga uma possível correlação entre a atividade de danificação de membranas 'Ca POT. 2+'-independente e o efeito bactericida. O efeito bactericida de BthTx-I e mutantes daproteína na região C-terminal foi avaliado contra bactéria Escheríchía colí (K12). A BthTx-I nativa e recombinante tipo- selvagem apresentaram alta atividade bactericida com uma concentração de 5 'mü'g/mL, porém as mutantes Y117W, Y119W, K122A e F125W reduziram significativamente este efeito, mostrando uma correlação entre os determinantes estruturais das atividades bactericida e de danificação em membranas artificiais. Na tentativa de correlacionar o ) o mecanismo de danificação de membranas artificiais com a atividade bactericida de BthTx-1 contra linhagem E.colí (K12), um estudo por partição de sondas fluorescentes em compartimentos celulares específicos foi realizado. A sonda hidrofóbica N-fenil-N-naftilamina (NPN) foi utilizada para avaliar a integridade da membrana externa da bactéria e a sonda Sytox Green (SG) para avaliar a integridade da membrana citoplasmática bacteriana. A cinética de permeabilização da membrana externa é rápida e não foi influenciada por mutagênese da região C-terminal da proteína. Entretanto, a cinética de permeabilização da membrana plasmática mostrou-se lenta, com um efeito máximo de 2 horas de ação e identificou os mesmos determinantes estruturais como os identificados para a atividade bactericida de BthTx-l. Resultados obtidos pelas técnicas de citometria de fluxo e microscopia eletrônica de transmissão auxiliaram os dados evidenciando a importância da região C-terminal de BthTx-I na atividade bactericida contra linhagemE.colí
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2005
- Data da defesa: 02.03.2005
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ABNT
ARAGÃO, Elisângela Aparecida. Efeito bactericida de fosfolipases A2-Lys49: o papel da C-terminal na atividade de Bothropstoxina-l em membranas biológicas e artificiais. 2005. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2005. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-08072008-112329/. Acesso em: 20 maio 2024. -
APA
Aragão, E. A. (2005). Efeito bactericida de fosfolipases A2-Lys49: o papel da C-terminal na atividade de Bothropstoxina-l em membranas biológicas e artificiais (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-08072008-112329/ -
NLM
Aragão EA. Efeito bactericida de fosfolipases A2-Lys49: o papel da C-terminal na atividade de Bothropstoxina-l em membranas biológicas e artificiais [Internet]. 2005 ;[citado 2024 maio 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-08072008-112329/ -
Vancouver
Aragão EA. Efeito bactericida de fosfolipases A2-Lys49: o papel da C-terminal na atividade de Bothropstoxina-l em membranas biológicas e artificiais [Internet]. 2005 ;[citado 2024 maio 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-08072008-112329/
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