Construção de um vetor caça-promotor de amplo espectro para bactérias Gram negativas (2005)
- Authors:
- Autor USP: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivos: A tecnologia do DNA recombinante permite, através de manuseio simples, fusionar sensores a genes repórteres, visando à construção de vetores adequados ao estudo da expressão gênica de bactérias submetidas a diferentes condições de cultivo e estresse. Os genes repórteres codificam a informação para a síntese de uma proteína, cuja atividade pode ser facilmente detectada. Neste trabalho, o gene repórter gfp ("green fluorescent protein"), que codifica a proteína repórter GFP, foi inserido no vetor de amplo espectro pBBR1-MCS para bactérias Gram-negativas. Métodos e Resultados: O vetor pBBR1-MCS (4707 pb) foi digerido com as enzimas EcoRV e BamHI. O fragmento referente ao gene gfp foi extraído do vetor pEGFP-N1 com as enzimas HpaI e BamHI liberando um fragmento de 860pb. A fusão dos fragmentos de DNA lineares obtidos foi realizada com T4 DNA ligase e a mistura de ligação foi utilizada para a transformação, por eletroporação, de células da linhagem Escherichia coli DH5\alpha. DNA plasmidial dos clones transformantes resistentes a cloranfenicol obtidos foram extraídos e tiveram o perfil das bandas analisados em gel de agarose 0,8% submetido à corrida eletroforética. Foi selecionado o clone transformante hospedeiro do vetor de aproximadamente 5500 pb que, após ter sido digerido com as enzimas HindIII e BamHI, liberou os fragmentos de 4700 pb e 860 pb, referentes ao vetor pBBR1-MCS e ao gene pEGFP-N1. Conclusão: O vetor caça-promotor de bactérias Gramnegativas foi construído com sucesso. Fragmentos de DNA poderão inseridos à montante do gene gfp na busca de novos promotores bacterianos cuja análise impõe que seja realizada em bactérias Gram-negativas não E. coli
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2005
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas
-
ABNT
QUADROS, Oeber de Freitas et al. Construção de um vetor caça-promotor de amplo espectro para bactérias Gram negativas. 2005, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2005. . Acesso em: 27 abr. 2024. -
APA
Quadros, O. de F., Biondo, R., Lima, M. N., & Vicente, E. J. (2005). Construção de um vetor caça-promotor de amplo espectro para bactérias Gram negativas. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Quadros O de F, Biondo R, Lima MN, Vicente EJ. Construção de um vetor caça-promotor de amplo espectro para bactérias Gram negativas. Resumos. 2005 ;[citado 2024 abr. 27 ] -
Vancouver
Quadros O de F, Biondo R, Lima MN, Vicente EJ. Construção de um vetor caça-promotor de amplo espectro para bactérias Gram negativas. Resumos. 2005 ;[citado 2024 abr. 27 ] - Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional PGTY-glico
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