Investigação do impacto biológico da galectina-1 sobre neutrófilos (2006)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, JULIANA DA SILVA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: S/D
- Subjects: NEUTRÓFILOS; INFLAMAÇÃO; IMUNOLOGIA CELULAR
- Language: Português
- Abstract: A galectina-l pertence a uma família de proteínas que reconhecem (ß-galactosídeos e participam de vários processos biológicos, incluindo ações sobre neutrófilos como a indução da exposição de fosfatidilserina (um marcador de apotose), a geração de espécies reativas do oxigênio (EROs) e a modulação de quimiotaxia. O neutrófilo é uma célula efetora importante da imunidade inata e sua homeostase ainda não esta totalmente esclarecida. Na literatura, são relativamente escassos os dados relacionados ao impacto biológico da galectina-l sobre os neutrófilos. Neste trabalho, foram avaliados alguns aspectos biológicos da interação galectina-l/neutrófilo, utilizando preparações de galectina-l recombinante humana (gal-l) derivatizada ou não com iodoacetamida (CAM-Gal-l, uma forma mais estável desta lectina) e submetidas ou não a cromatografia em colunas com agarose-polimixinaB (poli-B; remoção de LPS). As suspensões de neutrófilos foram obtidas do sangue periférico de doadores sadios e submetidas ou não a procedimento de "priming" com fMLP. Através de ensaios de quimiluminescência amplificada por luminol e de citometria de fluxo (marcação com anexina-V-FITC), foi analisada uma possível correlação de positividade entre as capacidades da galectina-l de induzir a geração de EROs e de provocar a exposição de fosfatidilserina nessas células. Neutrófilos tratados ou não com gal-l foram submetidos a ensaio de fagocitose e de atividade microbicida utilizando Candidaalbicans. Camundongos hiporresponsivos (C3H/HeJ) e/ou responsivos ao LPS (C57Bl-6) foram utilizados em ensaio de indução de migração de neutrófilos para cavidade peritoneal e nos ensaios in vitro de viabilidade de células da medula óssea positivas e negativas para GR1.1 (anticorpo monoclonal marcador de neutrófilos). Além disso, estes leucócitos primados ou não com fMLP foram desafiados com CAM-Gal-/PoliB visando a quantificação da expressão de genes, em nível de RNAm, que podem apresentar caráter pró-apoptótico (CASP-3, ZAP-70 e TGFbl) e/ou anti-apoptótico (GAL3), através da técnica de PCR em tempo real. Nestes experimentos, as taxas de expressão de RNAm obtidas para os diferentes genes de neutrófilos não-tratados foram consideradas como referência (valor = 1). Foram obtidos 45mg/L de gal-1 purificada com alto grau de homogeneidade (banda única de 14,9 kDa). As preparações de gal-1 ou CAM-Gal-1 apresentaram a mesma capacidade hemaglutinante. As suspensões neutrofilicas mostraram pureza e viabilidade de 95 a 98%. A gal-1 foi capaz de induzir a geração de EROs apenas em neutrófilos primados com fMLP e em valores muito inferiores ao PMA. Neutrófilos primados e tratados com gal-1 apresentaram elevada porcentagem de marcação com Anexina-V-FITC, diferentemente dos não primados. O DPI, um inibidor da NADPH-oxidase, bloqueou parcialmente (31%) este efeito da gal-l sobre neutrófilos primados, sem promover citotoxicidade. O tratamento de neutrófiloprimado ou não com gal-1 não interferiu com sua ação microbicida e provocou um aumento nos valores dos índices fagocíticos dessas células. Além disso, estes valores foram reduzidos aos níveis dos neutrófilos não-tratados com gal-1 pela ação inibidora do TDG e pela inativação térmica desta lectina. A gal-1 apresentou níveis de indução de migração neutrófilica semelhante ao controle negativo quando testada em animais C3H/HeJ. Além disso, preparações de CAM-Gal-1/PoliB não foram capazes de induzir migração em animais C57Bl-6. Células da medula óssea derivadas de camundongos C3H/HeJ quando cultivadas em RPMI completo, ao contrário do cultivo com PBS, apresentaram maior viabilidade, celular quando tratadas com gal-1. Células GRl.l negativas apresentaram taxa de inibição de necrose de 95,2% e células GRl.l positivas apresentaram taxas entre 52.4 e 73.6 %, após o desafio com essa lectina. Neutrófilos tratados com CAM-Gal-1/PoliB tiveram a expressão do mRNA do gene ZAP-70 diminuída mais em neutrófilos primados do que não primados (84 e 23%, respectivamente). Para o gene TGFb1, esse tratamento lectínico dos leucócitos provocou menores taxas de redução de sua expressão gênica, 36% para primados e 12% para os não primados., Entretanto, o gene da GAL3 apresentou expressão aumentada em neutrófilos tratados com CAM-Gal-l/PoliB primados ou não (392 e 319%, respectivamente). O gene da CASP-3 não apresentou variações significantes em todos os gruposexperimentais. Os resultados obtidos sugerem uma correlação parcial entre a geração de EROs e a exposição de fosfatidilserina induzidas por galectina-l em neutrófilos humanos. Entretanto, esses fenômenos parecem não conduzir os neutrófilos para o processo de apoptose, pois estes leucócitos tratados não reduziram suas atividades fagocíticas e microbicidas. Além disso, a galectina-1 foi capaz inibir, in vitro, a morte de células da medula óssea. Nessa linha, com base numa análise restrita e preliminar de expressão gênica, sugerimos que neutrófilos primados e tratados com gal-1 podem apresentar um direcionamento funcional para o escape da apoptose, sem o comprometimento de sua homeostase, a qual poderá ser mantida através de uma remoção de neutrófilos por fagócitos no sítio inflamatório. Finalmente, esses achados poderão auxiliar no melhor entendimento da participação da galecina-l no processo inflamatório e na homeostase celular
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 19.07.2006
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ABNT
OLIVEIRA, Juliana da Silva. Investigação do impacto biológico da galectina-1 sobre neutrófilos. 2006. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 19 maio 2024. -
APA
Oliveira, J. da S. (2006). Investigação do impacto biológico da galectina-1 sobre neutrófilos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Oliveira J da S. Investigação do impacto biológico da galectina-1 sobre neutrófilos. 2006 ;[citado 2024 maio 19 ] -
Vancouver
Oliveira J da S. Investigação do impacto biológico da galectina-1 sobre neutrófilos. 2006 ;[citado 2024 maio 19 ]
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