Screening de uma biblioteca de e expressão de cDNA de cerebelo de rato usando-se como sonda o anticorpo anti-KM+ e expressão de drebrinas em displasia cortical focal IIB associada com epilepsia de difícil controle medicamentoso (2007)
- Authors:
- Autor USP: MAIA, ROBERTA DE ASSIS - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RNP
- Subjects: NEUROQUÍMICA; EXPRESSÃO GÊNICA; EPILEPSIA
- Language: Português
- Abstract: p83 é uma proteína com massa molecular aparente de 83 kDa, supostamente ainda não descrita, específica de sistema nervoso, e desenvolvimento regulada. p83 interage fortemente com laminina, Tau, tubulina e heat shock protein 9013. p83 foi inicialmente detectada por imunohistoquímica e western blot usando-se um anticorpo anti-Iectina KM+ purificado por afinidade. Sua purificação a partir de cérebro de rato está em progresso. Identificar o envolvimento de p83 em processos do Sistema Nervoso Central humano é um passo necessário em direção à compreensão de sua função biológica. Uma biblioteca de expressão de cDNA de cerebelo de rato (Lambda ZAP II, Stratagene) foi submetida ao screening, usando-se um anticorpo específico para isolar o cDNA de p83. O anticorpo anti- KM+ foi pré-adsorvido contra proteínas de E. coli XL1 Blue MRF', antes de ser usado no screening. As membranas foram reveladas por imunodetecção cromogênica (fosfatase alcalina e NBT/BCIP). A análise de todos os clones Lambda ZAP II foi feita por excisão in vivo do fagomídeo pBluescript, subclonagem em E. coli XL1 Blue MRF', purificação do DNA plasmidial e digestão com Eco RI. A seqüência correspondente ao clone isolado foi analisada usando-se ferramentas e bancos de dados do NCBI. A seqüência nucleotídica mostrou identidade com as isoformas A e E de drebrina. As isoformas A e E de drebrina foram detectadas em adulto e embrião, respectivamente. Drebrina A é uma proteína sistema nervoso-específica,desenvolvimento regulada e associa-se com F- actina. Embora drebrina e p83 compartilhem propriedades em comum, nossos dados de western blot indicaram que parecem não se tratar da mesma proteína. Nós investigamos a expressão de drebrina em Displasia Cortical Focal tipo IIB, comparando com córtex normal. As secções de tecido foram coradas com hematoxilina- eosina e prata (Bielchowsky). Secções forma processadas por imunohistoquímica usando-se os anticorpos anti-drebrina M2F6 e o DAS2, e recuperação antigênica. A detecção foi feita usando-se um anticorpo biotinilado, e DAB como cromógeno. Os tecidos displásicos (13 casos) foram obtidos cirurgicamente de tecidos exibindo epilepsia droga-resistente. Os controles foram obtidos de necrópsia de 15 pacientes sem história prévia de doenças neurológicas ou alterações patológicas. Nossos resultados sugerem uma associação entre drebrina e DCF IIB, um distúrbio do desenvolvimento cortical
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2007
- Data da defesa: 01.06.2007
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ABNT
MAIA, Roberta de Assis. Screening de uma biblioteca de e expressão de cDNA de cerebelo de rato usando-se como sonda o anticorpo anti-KM+ e expressão de drebrinas em displasia cortical focal IIB associada com epilepsia de difícil controle medicamentoso. 2007. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17140/tde-13052010-153055/. Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Maia, R. de A. (2007). Screening de uma biblioteca de e expressão de cDNA de cerebelo de rato usando-se como sonda o anticorpo anti-KM+ e expressão de drebrinas em displasia cortical focal IIB associada com epilepsia de difícil controle medicamentoso (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17140/tde-13052010-153055/ -
NLM
Maia R de A. Screening de uma biblioteca de e expressão de cDNA de cerebelo de rato usando-se como sonda o anticorpo anti-KM+ e expressão de drebrinas em displasia cortical focal IIB associada com epilepsia de difícil controle medicamentoso [Internet]. 2007 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17140/tde-13052010-153055/ -
Vancouver
Maia R de A. Screening de uma biblioteca de e expressão de cDNA de cerebelo de rato usando-se como sonda o anticorpo anti-KM+ e expressão de drebrinas em displasia cortical focal IIB associada com epilepsia de difícil controle medicamentoso [Internet]. 2007 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17140/tde-13052010-153055/
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