Tese

Estudos moleculares de duas triptofanil tRNA sitetases do parasita Leishmania major e de uma cisteíno protease da bactéria Xylella fastidiosa (2007)

• Authors:
  • Leite, Ney Ribeiro
  • Thiemann, Otávio Henrique (Orientador)
• Autor USP: LEITE, NEY RIBEIRO - IFSC
• Unidade: IFSC
• Sigla do Departamento: FFI
• Subjects: CRISTALOGRAFIA; PROTEÍNAS; LEISHMANIA
• Language: Português
• Abstract: As aminoacil-tRNA-sintetases (AaRSs) são enzimas essenciais na síntese de proteínas assegurando a correta relação entre os aminoácidos e seus tRNA cognatos. O genoma mitocondrial dos tripanossomatídeos perdeu os genes codificantes dos tRNAs, assim os tRNA mitocondriais são codificados no núcleo e importados do citoplasma. O código genético do kinetoplasto desvia do código genético pela utilização do códon de terminação UGA para a decodificação do códon do triptofano. Um único gene codificando o tRNATrp(CCA) observado no genoma de Leismania é responsável pela incorporação do aminoácido triptofano durante a síntese proteíca na (UGA e UGG) a base mitocôndria. Para decodificar os dois códons do Trp (UGA e UGG) a base na posição 34 do tRNATrp(CCA) passa por um evento de editoração, convertendo o ribunuclotídeo C34 em U34, produzindo o tRN'A POT.Trp''(UCA) capaz de decodificar o códon UGA. Nesse trabalho foram caracterizadas duas triptofanil tRNA sintetases de Leishmania major. De acordo com experimentos de "westem blotting" e análises "in silico" das seqüências de aminoácidos, uma enzima tem localização citoplasmática (LmTrpRS1) enquanto a outra mitocondrial (LmTrpRS2). Os mRNAs dos dois genes foram definidos por experimentos de 5' e 3' RT-PCR. As duas enzimas foram donadas em diversos vetores de expressão procariotos e eucariotos. A LmTrpRS1 foi obtida somente na tração insolúvel, já a LmTrpRS2 foi obtida na tração solúvel quando donada no vetor de expressão pET28a. Estaporém mostrou-se instável precipitando rapidamente após sua purificação. Os ensaios enzimáticos realizados com a mesma mostraram que ela é capaz de reconhecer os tRN'As POT.Trp' editado e não editado. Modelagem molecular por homologia com as duas proteínas foi realizada usando a proteína citoplasmática humana como molde, para estudar a interação entre a proteína e o tRN'A POT.Trp'. ) Xylella fastidiosa é um bactéria gram negativa limitada ao xilema,responsável por um grande número de doenças economicamente importantes, como a doença de Pierces em videiras, Clorose variegata do Citrus (CVC) e a doença da requeima das falhas em outras plantas incluindo, amendoeira, ameixeira, louro, amoreira e café. Em todos os casos a X fastidiosa afeta o xylema da planta causando redução na produção de trutos. Nesse trabalho nós mostramos a estrutura da Xylellaína, uma cisteíno protease desse patógeno. A estrutura foi resolvida por dispersão anômala a um único comprimento de onda, utilizando cristais de xylellaína selenometionina substituídos. A estrutura da Xylellaína foi refinada até 1,65 'angstron' de resolução, mostrando enovelamento similar às proteínas da família da papaína, porém algumas características interessantes como uma região N-terminal composta por 38 aminoácidos cobrindo o sulco ativo da enzima, um intrigante ribonucleotídeo encontrado fora do sítio ativo da enzima e um "loop" semelhante ao "loop" de odusão presente na catepsina B
• Imprenta:
  • Publisher place: São Carlos
  • Date published: 2007
• Data da defesa: 16.07.2007


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How to cite

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• ABNT

  LEITE, Ney Ribeiro. Estudos moleculares de duas triptofanil tRNA sitetases do parasita Leishmania major e de uma cisteíno protease da bactéria Xylella fastidiosa. 2007. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2007. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-08092007-163023/. Acesso em: 21 maio 2024.

• APA

  Leite, N. R. (2007). Estudos moleculares de duas triptofanil tRNA sitetases do parasita Leishmania major e de uma cisteíno protease da bactéria Xylella fastidiosa (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-08092007-163023/

• NLM

  Leite NR. Estudos moleculares de duas triptofanil tRNA sitetases do parasita Leishmania major e de uma cisteíno protease da bactéria Xylella fastidiosa [Internet]. 2007 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-08092007-163023/

• Vancouver

  Leite NR. Estudos moleculares de duas triptofanil tRNA sitetases do parasita Leishmania major e de uma cisteíno protease da bactéria Xylella fastidiosa [Internet]. 2007 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-08092007-163023/

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