Estudos estruturais e funcionais de diidroorotato desidrogenases (2008)
- Authors:
- Autor USP: CARVALHO, SHEILA GONÇALVES DO COUTO - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: ESTRUTURA DA MEMBRANA (MODELOS); BIOQUÍMICA; BIOLOGIA MOLECULAR; PROTEÍNAS
- Language: Português
- Abstract: As enzimas diidroorotato desidrogenases (DHODHs) são flavo-enzimas que catalisam a oxidação do diidroorotato em orotato na quarta etapa da biossíntese de novo de nucleotídeos de pirimidina. Durante a rápida proliferação celular em mamíferos, a via de salvação de pirimidinas é insuficiente para suprir deficiências na síntese de nucleotídeos. Além disso, certos parasitas não possuem a via de salvação e contam somente com a biossíntese de novo para a produção de nucleotídeos. Por esta razão, DHODH se tornou um excelente alvo na busca por inibidores que interrompam a síntese de nucleotídeos. As enzimas DHODHs de E. coli (EcDHODH) e de X. fastidiosa (XfDHODH) são membros da classe 2 das DHODHs e encontram-se associadas à membrana citoplasmática através de uma extensão em seu N-terminal, enquanto que DHODH de T. cruzi (TcDHODH), membro da classe 1 de DHODHs, é uma proteína citosólica. Neste trabalho, usamos uma combinação de metodologias de biologia molecular e bioquímica com técnícas espectroscópicas para obter informações estruturais e funcionais acerca da enzima DHODH. Assim, Ressonância Paramagnética Eletrônica (RPE) associada à marcação de spin sítio dirigida (SDSL) e simulação espectral foram empregadas para estudar a interação da EcDHODH com modelos de membrana. Mudanças na dinâmica estrutural das vesículas induzidas pela enzima foram monitoradas via marcadores de spin localizados em diferentes posições ao longo da cadeia acil de fosfolipídios. Além disso,técnicas de DNA recombinante e mutações sítio dirigidas foram utilizadas para produzir mutantes de EcDHODH no qual um sondas paramagnéticas foram seletivamente ligadas em resíduos localizados na extensão N-terminal da proteína para experimentos subseqüentes de RPESDSL. Esses são os primeiros experimentos de marcação de spin sítio dirigida realizados no Brasil e com os quais monitoramos a dinâmica experimentada na região do N-terminal )Além disso, várias tentativas foram feitas para se expressar e purificar a enzima XfDHODH e a estabilidade estrutural da enzima TcDHODH na presença de um de seus inibidores naturais, o orotato, foi monitorada através de experimentos de Dicroísmo Circular (CD)
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2008
- Data da defesa: 28.03.2008
-
ABNT
CARVALHO, Sheila Gonçalves do Couto. Estudos estruturais e funcionais de diidroorotato desidrogenases. 2008. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2008. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-05052008-152108/. Acesso em: 25 abr. 2024. -
APA
Carvalho, S. G. do C. (2008). Estudos estruturais e funcionais de diidroorotato desidrogenases (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-05052008-152108/ -
NLM
Carvalho SG do C. Estudos estruturais e funcionais de diidroorotato desidrogenases [Internet]. 2008 ;[citado 2024 abr. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-05052008-152108/ -
Vancouver
Carvalho SG do C. Estudos estruturais e funcionais de diidroorotato desidrogenases [Internet]. 2008 ;[citado 2024 abr. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-05052008-152108/
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
