Minimização da estrutura da DisBa-01, uma desintegrina com potenciais atividades anti-trombótica e anti-metastática (2008)
- Authors:
- Autor USP: GONÇALVES, DANIELE FERNANDA CHIARELLI - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: PROTEÍNAS; CLONAGEM; VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; ANÁLISE DE SEQUÊNCIA DE DNA; FÁRMACOS
- Language: Português
- Abstract: A DisBa-01, uma desintegrina RGD recombinante ainda não isolada do veneno de Bothrops alternatus, exibe alta afinidade pela integrina 'alfa IND.'pi'b''beta IND.3', contribuindo para inibição da agregação plaquetária (RAMOS, 2005). DisBa-01 possui também atividades anti-trombótica e anti-metastática comprovadas in vivo (Ramos, 2005). A fim de obter moléculas menores mantendo as atividades da DisBa-01, dois mutantes estão em estudo. Moléculas chamadas DisBa ('delta'1-32) e DisBa ('delta'1-36) apresentam 32 e 36 resíduos a menos que a DisBa-01, respectivamente, na região N-terminal. Oligonucleotídeos foram construídos e os DNAs foram amplificados por PCR utilizando o plasmídeo pET28a-DisBa-01 como o molde. Os produtos de PCR foram clonados no vetor de expressão pET32a. Análises das seqüências revelaram que os genes e sua fase de leitura estavam completamente corretos. Os plasmídeos recombinantes foram introduzidos em linhagem BL21 (DE3) de E.coli. Os plasmídeos recombinantes foram induzidos com 0,3 mM de IPTG a expressar as proteínas em fusão com a tiorredoxina. As proteínas foram expressas na forma solúvel e com massa molecular coincidente com a previsão. As proteínas de fusão foram purificadas por cromatografia de afinidade em resina de níquel e clivadas com a enzima enteroquinase. As amostras clivadas foram purificadas por cromatografia de filtração a gel. Os passos de purificação e clivagem foram analisados por SDS-PAGE e reação de immunoblotting utilizando oanticorpo antiEchistatin. Testes de inibição da adesão celular, usando células de melanoma de camundongo B16FI0 ricas em integrina 'alfa'V'beta'3, mostraram que a DisBa ('delta'1-32) e a DisBa ('delta'1-36) são capazes de inibir, aproximadamente, 70% da adesão celular, um resultado semelhante ao encontrado para a molécula de DisBa-01. Portanto, as duas moléculas mutantes da DisBa-01 obtidas apresentaram atividades que podem ser exploradas no desenho de ) novos medicamentos contra câncer
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2008
- Data da defesa: 27.03.2008
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ABNT
GONÇALVES, Daniele Fernanda Chiarelli. Minimização da estrutura da DisBa-01, uma desintegrina com potenciais atividades anti-trombótica e anti-metastática. 2008. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2008. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-12052008-185026/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Gonçalves, D. F. C. (2008). Minimização da estrutura da DisBa-01, uma desintegrina com potenciais atividades anti-trombótica e anti-metastática (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-12052008-185026/ -
NLM
Gonçalves DFC. Minimização da estrutura da DisBa-01, uma desintegrina com potenciais atividades anti-trombótica e anti-metastática [Internet]. 2008 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-12052008-185026/ -
Vancouver
Gonçalves DFC. Minimização da estrutura da DisBa-01, uma desintegrina com potenciais atividades anti-trombótica e anti-metastática [Internet]. 2008 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-12052008-185026/
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