Clonagem e expressão de fragmentos de anticorpo de cadeia única (scFv) anti-LDL eletronegativa em Pichia pastoris (2008)
- Authors:
- Autor USP: TELLES, ANDRÉIA ELISA RODRIGUES - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBT
- Subjects: ANTICORPOS MONOCLONAIS; CLONAGEM; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Language: Português
- Abstract: As modificações das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) são uma etapa essencial na aterogênese pois acarretam a geração de LDL eletronegativa [LDL(-)] que apresenta propriedades quimiotática, citotóxica, imunogênica e pró-inflamatória. O objetivo deste trabalho foi a produção de hibridomas secretores de anticorpos monoclonais anti-LDL(-), a clonagem dos genes que codificam para as cadeias variáveis destes anticorpos, e sua expressão como fragmentos de anticorpo de cadeia única (scFv). A LDL(-) isolada de plasma humano foi utilizada como antígeno para imunização de camundongos BALB/c. Após triagem dos clones, dois anticorpos monoclonais foram obtidos baseados em sua reatividade pela LDL(-) e não pela LDL nativa: 1A3H2 (1A3) e 2C7D5F10 (2C7). Os cDNAs codificante para a cadeia pesada (´V IND.H´) e cadeia leve (´V IND.L´) , de ambos os anticorpos, foram obtidos por meio de RT-PCR utilizando bibliotecas de oligonucleotídeos que reconhecem todas os genes de domínios variáveis das famílias de ´V IND.H´ e ´V IND.L´ murinas. Os genes ´V IND.H´ e ´V IND.L´ obtidos foram clonados no vetor pGEM-T Easy (´Promega MARCA REGISTRADA´) e suas seqüências determinadas. A ´V IND.H´ do anti-LDL(-) 1A3 pertence família J558.84 e fragmento gênico ´J IND.H´2, enquanto sua ´V IND.L´ pertence a família 8.24 e fragmento gênico ´J IND.k´5. A ´V IND.H´ do anti-LDL(-) 2C7 pertence a família Vmu 3.2 (J558) e fragmento gênico J'H IND.4´, enquanto sua VL pertence a família 8.24 efragmento gênico Jk5. A partir disso, oligonucleotídeos sintéticos foram sintetizados a fim de clonar estes segmentos gênicos no vetor pPlgLE de expressão em Pichia pastoris. Foram realizadas três 'construções: o scFv 1A3, scFV 2C7 e um scFv híbrido (V IND.H´ do 1A3 e ´V IND.L´ do 2C7). Das três construções obtidas, conseguimos expressar o scFv do anti-LDL 2C7D5F1 O que demonstrou ser capaz de reconhecer o antígeno. A proteína recombinante expressa tem ) grande potencial de ser usada no diagnóstico clínico incluindo imunoensaios in vitro e como reagentes para exames que envolvam a obtenção e análise de imagens
- Imprenta:
- Data da defesa: 08.04.2008
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ABNT
TELLES, Andréia Elisa Rodrigues. Clonagem e expressão de fragmentos de anticorpo de cadeia única (scFv) anti-LDL eletronegativa em Pichia pastoris. 2008. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2008. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-29092017-110802/. Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Telles, A. E. R. (2008). Clonagem e expressão de fragmentos de anticorpo de cadeia única (scFv) anti-LDL eletronegativa em Pichia pastoris (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-29092017-110802/ -
NLM
Telles AER. Clonagem e expressão de fragmentos de anticorpo de cadeia única (scFv) anti-LDL eletronegativa em Pichia pastoris [Internet]. 2008 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-29092017-110802/ -
Vancouver
Telles AER. Clonagem e expressão de fragmentos de anticorpo de cadeia única (scFv) anti-LDL eletronegativa em Pichia pastoris [Internet]. 2008 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-29092017-110802/
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