Alteração do perfil de expressão gênica induzida pela expansão in vitro de células precursoras hematopoéticas (2008)
- Authors:
- Autor USP: ZANETTE, DALILA LUCÍOLA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Subjects: EXPRESSÃO GÊNICA; CÉLULAS-TRONCO (TÉCNICAS IN VITRO)
- Language: Português
- Abstract: O número total de células precursoras é o principal fator limitante para o uso do sangue de cordão umbilical (SCU) como fonte de células precursoras hematopoéticas (CPHs). A expansão in vitro destas células seria uma alternativa promissora. No entanto, quando usadas em transplantes, as células expandidas geralmente não apresentam vantagens em relação às células frescas. Este estudo foi feito para acumular conhecimentos acerca dos mecanismos moleculares ativos nas CPHs cultivadas, com intenção de sugerir melhorias nos protocolos de expansão existentes. As amostras de células 'CD34 POT. +' de SCU foram cultivadas com citocinas, na ausência de soro e estroma. No momento da purificação (t0) e depois de 3 dias de cultivo (t3), as células foi verificada por citometria de fluxo a porcentagem de células em apoptose, a de células com fenótipos primitivos ('CD34 POT. +'/'CD38 POT. neg' e 'CD34 POT. +'/'CD90 POT. +') e duplamente positivas para 'CD34 POT. +' e 'CXCR4 POT. +'. O potencial clonogênico e de diferenciação foi avaliado em ensaios de metilcelulose. Com o RNA das amostras foram feitos pools para gerar dois perfis de expressão gênica independentes, das células em t0 e em t3, usando microarrays de oligonucleotídeos. As amostras foram utilizadas individualmente para avaliar a expressão dos genes IL9R, SMAD6, BIRC5, CDC25C, WNT5B, WIF1, GSK3B, AKT1, Bmi-1, HOXB4 e CCND1 por PCR quantitativa em tempo real (qPCR). Foi encontrado um aumento médio de 2,8 vezes nonúmero de total de células e pelo menos 80% das células expressavam o CD34 após o cultivo. O número absoluto de células 'CD34 POT. +'/'CD38 POT. neg' e 'CD34 POT. +'/'CD90 POT. +' aumentou 2 e 6 vezes respectivamente. Havia uma maior porcentagem de células viáveis em t3 comparado com t0 (média de 75% e 63%, respectivamente). A porcentagem de células 'CD34 POT. +'/'CXCR4 POT. +' foi significativamente menor em t3. O número absoluto e relativo de colônias, demonstrado pelos ensaios clonogênicos, não se alterou, indicando que a capacidade de diferenciação foi mantida pelas células cultivadas. Genes envolvidos com o ciclo celular e com a mitose estavam regulados positivamente em t3, como o CDC25C. A expressão dos genes reguladores intrínsecos de CPHs, HOXB4 e Bmi-1, estava significativamente diminuída em t3. Também foram confirmadas a menor expressão de CXCR4, que tem conhecida função de favorecer o homing; de GSK3B, que participa da via Wnt; e de WIF1, inibidor desta mesma via. Observamos a regulação positiva de genes como o IL9-R, associado com proliferação através da via JAK/STAT; SMAD6, um regulador negativo da via TGF-'beta'1; WNT5B, um ligante da via de sinalização Wnt, e BIRC5, um inibidor da apoptose. Desta maneira, o uso deste protocolo de curto prazo expandiu o número de células 'CD34 POT. +', aumentou o número absoluto de células com fenótipo associado às CPHs, sem afetar a viabilidade e o potencial clonogênico destas células. Aavaliação funcional das alterações da expressão gênica que acompanharam o cultivo deverá ajudar a melhorar os protocolos de expansão de CPHs mantendo as características celulares desejadas
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2008
- Data da defesa: 15.05.2008
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ABNT
ZANETTE, Dalila Lucíola. Alteração do perfil de expressão gênica induzida pela expansão in vitro de células precursoras hematopoéticas. 2008. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. . Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Zanette, D. L. (2008). Alteração do perfil de expressão gênica induzida pela expansão in vitro de células precursoras hematopoéticas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Zanette DL. Alteração do perfil de expressão gênica induzida pela expansão in vitro de células precursoras hematopoéticas. 2008 ;[citado 2024 maio 21 ] -
Vancouver
Zanette DL. Alteração do perfil de expressão gênica induzida pela expansão in vitro de células precursoras hematopoéticas. 2008 ;[citado 2024 maio 21 ]
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