Construção de linhagem de Saccharomyces cerevisiae recombinante expressando Glicoamilase ancorada à superficie celular (2009)
- Authors:
- USP affiliated authors: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB ; SCHENBERG, ANA CLARA GUERRINI - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Sistemas do tipo "cell surface display" vêm sendo desenvolvidos para expressão de proteínas heterólogas ancoradas à superficie celular de microrganismos. Varias aplicações deste sistema foram reportadas, incluindo o emprego como biocatalizadores, desenvolvimento de vacinas e biossorventes celulares. Neste trabalho, foi desenvolvido um sistema que permite ancoragem da proteina recombinante glicoamilase de Aspergillus awamori à superficie da parede celular da levedura Saccharomyces cereevisiae. O c-DNA codificador da glicoamilase com sua sequência sinal de secreção foi fusionado ao fragmento do gene codificador da região C-terminal da proteína Flo1p de S. cerevisiae empregada como âncora. A fusão gênica foi expressa sob a regulação do promotor do gene codificador da fosfoglicerato quinase (PGK). O cassete de expressão e ancoragem construído, contendo a fusão gênica, foi ladeado por fragmentos do gene CAN1 de S. cerevisiae, permitindo a integração da informação no genoma da levedura. Para a construção desse cassete foi utilizado a técnica do SOEing PCR , uma técnica simples e versátil que permite unir dois fragmentos de DNA amplificados por PCR. Este cassete de expressão e ancoragem, denominado Fragmento CG*FC e o gene CAN1 residente no cromossomo V da linhagem hospedeira. Os clones transformantes de levedura foram capazes de utilizar diretamente o amido como única fonte de carbono e liberar glicose para o crescimento celular. A atividade da glicoamilase foidetectada, por ensaio enzimático, no sedimento de células, porém não foi detectada no meio de cultura. Conclui-se, portanto, que a atividade da glicoamilase está associada à fração celular de novos clones recombinantes de levedura. Confirmou-se o sucesso da ancoragem de glicoamilase à parede celular da linhagem recombinante de levedura por microscopia de imunofluorescência
- Imprenta:
- Publisher: Sociedade Brasileira de Microbiologia
- Publisher place: Porto de Galinhas
- Date published: 2009
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso Brasileiro de Microbiologia
-
ABNT
FUENTES RIVERA, J. P. N. et al. Construção de linhagem de Saccharomyces cerevisiae recombinante expressando Glicoamilase ancorada à superficie celular. 2009, Anais.. Porto de Galinhas: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2009. . Acesso em: 01 maio 2024. -
APA
Fuentes Rivera, J. P. N., Pereira, A., Schenberg, A. C. G., & Vicente, E. J. (2009). Construção de linhagem de Saccharomyces cerevisiae recombinante expressando Glicoamilase ancorada à superficie celular. In Resumos. Porto de Galinhas: Sociedade Brasileira de Microbiologia. -
NLM
Fuentes Rivera JPN, Pereira A, Schenberg ACG, Vicente EJ. Construção de linhagem de Saccharomyces cerevisiae recombinante expressando Glicoamilase ancorada à superficie celular. Resumos. 2009 ;[citado 2024 maio 01 ] -
Vancouver
Fuentes Rivera JPN, Pereira A, Schenberg ACG, Vicente EJ. Construção de linhagem de Saccharomyces cerevisiae recombinante expressando Glicoamilase ancorada à superficie celular. Resumos. 2009 ;[citado 2024 maio 01 ] - Isolation of Trypanosoma cruzi dna fragments which function as ars elements in Saccharomyces cerevisiae
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