Estudos estruturais e funcionais da proteína ligadora de molibdato (ModA) e demais componentes do sistema de transporte de molibdato tipo ABC de Xanthomonas axonopodis pv. citri (2010)
- Authors:
- Autor USP: PEREZ, CAROLINA SANTACRUZ - BIOTECNOL
- Unidade: BIOTECNOL
- Subjects: PROTEÍNAS DE TRANSPORTE; CRISTALOGRAFIA QUÍMICA; TRANSPORTE BIOLÓGICO
- Language: Português
- Abstract: Neste trabalho, após a obtenção dos resultados preliminares da proteína ligadora de molibdato (ModA) de Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) (Santacruz et. al., 2006), apresentamos a resolução, refinamento e análise da estrutura cristalográfica da mesma (Balan et. al., 2008), depositada no banco de dados PDB com o código 2H5Y. A estrutura da proteína revelou os resíduos envolvidos com a interação como também uma lisina e um ácido glutâmico importantes para a manutenção do bolsão. Estes resíduos foram alvos de mutagênese sítio-dirigida e as proteínas mutadas (Mut1: K127S e Mut2: D59A) foram expressas, purificadas e usadas para ensaios de cristalização e espectroscópicos de CD e fluorescência. Verificou-se que a mutação que impede a interação entre os domínios e a formação adequada do bolsão (Mut2) altera a estrutura tri-dimensional da proteína e sua interação com o molibdato, de forma a impossibilitar a formação de cristais de boa qualidadePor outro lado, a mutação K127S, que mantém interações entre os domínios, permitiu o enovelamento correto da ModA, sua interação com o molibdato e a resolução da estrutura deste mutante com 1.5 A de resolução (código PDB 3GZG), utilizando o método de substituição molecular e as coordenadas estruturais da proteína nativa como molde. As análises espectroscópicas do Mut1 por dicroísmo circular e fluorimetria mostraram que a mutação K127S leva à diminuição da estabilidade térmica da proteína na sua forma ligada, mas conserva intactas as suas características estruturais e sua função ligadora. Adicionalmente, a caracterização da ModA envolveu ensaios de Dinâmica Molecular para determinação dos movimentos de abertura e fechamento da proteína. As análises revelaram que os dois domínios da proteína apresentam movimentação na ausência do ligante e que o domínio C-terminal é determinante para a interação com o ligante. Dado que a ModA é uma proteína pertencente ao grupo II de periplasmáticas ligadoras, este resultado pode ser extrapolado para outras proteínas do mesmo grupoCom o objetivo de caracterizar o transportador de molibdato completo, com as proteínas permeases e ATPases, ainda foram realizados ensaios de clonagem e expressão das proteínas, sem contudo resultados satisfatórios. Neste caso, o sistema de transporte de molibdato de Xac foi caracterizado por modelagem molecular e revelou diferenças significativas quando comparado com diferentes transportadores com estrutura resolvida e com o seu similar encontrado na arquea Archaeoglobus fulgidus
- Imprenta:
- Data da defesa: 23.02.2010
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ABNT
PÉREZ, Carolina Santacruz. Estudos estruturais e funcionais da proteína ligadora de molibdato (ModA) e demais componentes do sistema de transporte de molibdato tipo ABC de Xanthomonas axonopodis pv. citri. 2010. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. . Acesso em: 03 jun. 2024. -
APA
Pérez, C. S. (2010). Estudos estruturais e funcionais da proteína ligadora de molibdato (ModA) e demais componentes do sistema de transporte de molibdato tipo ABC de Xanthomonas axonopodis pv. citri (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Pérez CS. Estudos estruturais e funcionais da proteína ligadora de molibdato (ModA) e demais componentes do sistema de transporte de molibdato tipo ABC de Xanthomonas axonopodis pv. citri. 2010 ;[citado 2024 jun. 03 ] -
Vancouver
Pérez CS. Estudos estruturais e funcionais da proteína ligadora de molibdato (ModA) e demais componentes do sistema de transporte de molibdato tipo ABC de Xanthomonas axonopodis pv. citri. 2010 ;[citado 2024 jun. 03 ]
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