Estudos proteômicos e caracterização da proliferação e migração celular em linhagens celulares derivadas de GBM estimuladas por EGF (2010)
- Authors:
- Autor USP: RAMÃO, ANELISA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: LINHAGEM CELULAR; PROTEÍNAS
- Language: Português
- Abstract: Glioma é um dos tipos mais comuns de tumor primário no SNC adulto. É classificado em quatro graus, dos quais o glioblastoma multiforme (GBM), grau IV, é o mais agressivo, com média de sobrevivência de até um ano após diagnóstico. Surge como consequência do acúmulo de mutações no genoma que provocam desregulação de inúmeras vias de sinalização intracelular, dentre as quais estão aquelas ativadas pelo receptor do fator de crescimento epidermal (EGFR). EGFR pertence a uma família de receptores tirosina-quinases relacionada a cascatas de sinalização intracelular que modulam a proliferação, sobrevivência, adesão, migração e diferenciação celular. O presente trabalho utilizou duas linhagens, U87MG e T98G, derivadas de glioblastoma multiforme para estudos proteômicos e funcionais sob estímulo de EGF. A abordagem proteômica utilizada baseou-se na separação das proteínas por eletroforese bidimensional e shotgun proteomics combinando eletroforese SDS-PAGE e cromatografia liquida em fase reversa (SDS-PAGE-LC-MS/MS). Os ensaios biológicos funcionais incluíram medidas da proliferação e migração celular. As linhagens T98G e U87MG possuem diferentes capacidades para a indução de formação de tumor em camundongos imunossuprimidos. A linhagem celular U87MG apresentou maior taxa de proliferação basal quando comparado a linhagem T98G, mas ambas foram pouco responsivas ao estímulo de EGF. A migração celular na linhagem U87MG também foi maior que em T98G sem estímulo, porém quandoas células foram estimuladas por EGF, a linhagem T98G foi mais responsiva e apresentou aumento significativo na migração celular comparada a U87MG e foi seis vezes maior do que seu controle. A comparação de ambas as linhagens por técnicas proteômicas revelou a presença de proteínas relacionadas ao aumento de proliferação e migração/invasão celular, que estavam prevalentes nas ) células U87MG, sugerindo que elas possam contribuir para o fenótipo tumorigênico das células U87MG. Entre elas estão, a proteína 14-3-3 relacionada à proliferação celular e as proteínas anexina A1 e estatimina envolvidas na migração/invasão celular. A análise proteômica por gel bidimensional e shotgun proteomics das duas linhagens estimuladas por EGF revelou proteínas envolvidas em vias metabólicas e em processos celulares que estão implicados na manutenção do tumor, tais como triosefosfato isomerase, alfa-enolase e superóxido dismutase. O fosfoproteoma das linhagens foi obtido a partir do enriquecimento dos fosfopeptídeos através de precipitação por fosfato de cálcio e coluna de afinidade por metal (IMAC). As fosfoproteínas identificadas estão envolvidas no metabolismo, tradução de sinais e processos biológicos como proliferação e migração celular. Alguns dos sítios fosforilados encontrados já foram citados na literatura. Entretanto, novos sítios de fosforilação foramdemonstrados, os quais abrem perspectivas para estudos funcionais destas proteínas, bem como inferências sobre as enzimasquinases/fosfatases envolvidas nessas modificações pós-tradução, nos quais esses fosfopeptídeos são substratos. Além disso, o processo de enriquecimento de fosfopeptídeos permitiu a detecção de proteínas pouco abundantes que não foram detectados por gel bidimensional ou shotgun proteomics. Esse estudo abre novas perspectivas para investigações sobre a caracterização de mecanismos moleculares envolvidos na capacidade diferencial de U87MG e T98G induzirem a formação de tumores
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2010
- Data da defesa: 05.02.2010
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ABNT
RAMÃO, Anelisa. Estudos proteômicos e caracterização da proliferação e migração celular em linhagens celulares derivadas de GBM estimuladas por EGF. 2010. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. . Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Ramão, A. (2010). Estudos proteômicos e caracterização da proliferação e migração celular em linhagens celulares derivadas de GBM estimuladas por EGF (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Ramão A. Estudos proteômicos e caracterização da proliferação e migração celular em linhagens celulares derivadas de GBM estimuladas por EGF. 2010 ;[citado 2024 maio 21 ] -
Vancouver
Ramão A. Estudos proteômicos e caracterização da proliferação e migração celular em linhagens celulares derivadas de GBM estimuladas por EGF. 2010 ;[citado 2024 maio 21 ]
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