Mecanismos envolvidos nas respostas celulares ao antitumoral cisplatina associado ao inibidor de PI3K (LY294002) em linhagens de glioma (2010)
- Authors:
- Autor USP: CARMINATI, PATRICIA DE OLIVEIRA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: TUMOR CARCINOIDE; REPARAÇÃO DE DNA; EXPRESSÃO GÊNICA; GENÉTICA
- Language: Português
- Abstract: Os gliomas malignos são os tumores primários do sistema nervoso central mais comuns, sendo os mais agressivos e mais difíceis de serem tratados. Dessa maneira, novas estratégias de tratamento, buscando aumentar a taxa de indução de morte celular, têm sido investigadas. Neste estudo, foram analisadas as respostas celulares ao tratamento com a cisplatina, associada ou não ao LY294002 (inibidor da família de proteínas PI3K e DNA-PK) em células de glioma, linhagens U343, U87 (ambas proficientes para TP53), além de MO59K e MO59J (proficiente e deficiente para DNA-PK, respectivamente). Os resultados mostraram que a cisplatina causou uma grande diminuição na porcentagem de células sobrevivestes (linhagens U343 e U87), sendo que o LY294002 aumentou o efeito da cisplatina. As células U343 sofreram apoptose em resposta à cisplatina e cisplatina+LY294002, o que não foi observado nas células U87. Também foi detectado um leve bloqueio em S nas células U343 após o tratamento com a cisplatina. A linhagem MO59K foi resistente à cisplatina em comparação à MO59J, sendo observado um bloqueio na fase S do ciclo celular nas células MO59K. A análise dos nivele de expressão protéica revelou que TFIIHp80 (função associada ao reparo do DNA) foi expressa em todos os tratamentos empregados. PCNA (duplicação e reparo do DNA) se expressou em todas as condições testadas (U343), apresentando um aumento de expressão dependente da concentração nas células MO59K após o tratamento com a cisplatina, condizente com o bloqueio em S. Por outro lado, não houve uma alteração na expressão de PCNA nas células MO59J. A expressão de SAPK/JNK apresentou níveis basais nas células não tratadas. As proteínas envolvidas na percepção e sinalização dos danos induzidos no DNA (como ATR, CHKl e TP53) apresentaram uma maior expressão nas amostras tratadas com cisplatina e cisplatina+LY294002. Adicionalmente,verificou-se a formação de foci de γH2AX nas células tratadas com cisplatina e cisplatina+LY294002, condizente com a geração de DSBs pela - cisplatina como lesões secundários. A análise da expressão gênica por cDNA microarrays mostrou 108 genes significativamente modulados (28 induzidos e 80 reprimidos) pelo tratamento com cisplatina, 274 genes (94 induzidos e 180 reprimidos) modulados pelo tratamento com cisplatina+LY294002, e 33 genes (6 induzidos e 27 reprimidos) modulados por LY294002. O tratamento combinado causou uma maior alteração transcricional nas células U343 relativamente aos demais tratamentos (cisplatina ou LY294002). Os genes modulados estão relacionados principalmente com os processos de reparo do DNA (RAD51D, RAD52, ATR, NBSI e PRKDC), apoptose (FOXO3A, CASP8AP2, BIRC2, CAVI e DUSP22), controle do ciclo celular e proliferação (CDC14A, SESN1, SRPK2, EGFR e MAPK6), e adesão celular (CDH13, ADAM12, SPPI e STOML2). O gene PRKDC, o qual codifica a DNA-PK, foi reprimido nas células tratadas com cisplatina+LY294002 e LY294002, confirmando o efeito inibitório do LY294002. Os padrões de expressão de alguns genes (PRKDC, DUSP22, FEN1, BTG2, CAV1 e RAD52) por PCR em tempo real foram similares aos perfis de expressão gerados pelo método de microarrays. Em conclusão, os resultados apresentados demonstraram que LY294002 associado à cisplatina aumentou os efeitos causados pela droga sozinha, fato que pode ser devido à inibição de DNAPK, a qual está envolvida no reparo NHEJ (non-homologous end joining). Os resultados obtidos também indicam que a DNA-PK é um determinante crítico da sobrevivência celular após exposição à cisplatina, e a falta de um bloqueio em S nas células MO59J é provavelmente responsável pelo aumento de morte celular após o tratamento com a cisplatina. O presente estudo sugere que a DNA-PK constitui um alvo terapêutico eficiente para sensibilizar ascélulas de glioma à cisplatina
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2010
- Data da defesa: 26.03.2010
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ABNT
CARMINATI, Patricia de Oliveira. Mecanismos envolvidos nas respostas celulares ao antitumoral cisplatina associado ao inibidor de PI3K (LY294002) em linhagens de glioma. 2010. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. . Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Carminati, P. de O. (2010). Mecanismos envolvidos nas respostas celulares ao antitumoral cisplatina associado ao inibidor de PI3K (LY294002) em linhagens de glioma (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Carminati P de O. Mecanismos envolvidos nas respostas celulares ao antitumoral cisplatina associado ao inibidor de PI3K (LY294002) em linhagens de glioma. 2010 ;[citado 2024 maio 21 ] -
Vancouver
Carminati P de O. Mecanismos envolvidos nas respostas celulares ao antitumoral cisplatina associado ao inibidor de PI3K (LY294002) em linhagens de glioma. 2010 ;[citado 2024 maio 21 ]
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