Modificação genética de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) visando à produção de ácidos graxos conjugados (2010)
- Authors:
- Autor USP: BORTOLETO, JOAO FERNANDO - ESALQ
- Unidade: ESALQ
- Sigla do Departamento: LGN
- Subjects: ÁCIDO LINOLEICO; ÁCIDOS GRAXOS; BIOLÍSTICA; BIOTECNOLOGIA DE PLANTAS; CANA-DE-AÇÚCAR; ENGENHARIA GENÉTICA; ISÔMERO; PLANTAS TRANSGÊNICAS
- Language: Português
- Abstract: Plantas transgênicas constituem interessantes alternativas para a produção de compostos com elevado valor agregado como polímeros industriais, proteínas farmacológicas e lipídios nutracêuticos. Como candidata à biofábrica, a cana-de-açúcar (Saccharum spp.) apresenta características agronômicas favoráveis, além de versatilidade de matéria-prima, que é empregada em fins tradicionais, como produção de álcool e açúcar, e até mesmo para geração de energia ou como forragem para alimentação de gado. Em nutrição animal, uma molécula bastante estudada é o ácido linoleico conjugado (CLA), que tem atividades anticarcinogênica, antidiabética, antiaterosclerose e moduladora do sistema imune e metabolismo de lipídios. O isômero t10,c12- CLA tem sido particularmente promissor na agropecuária por conta de inibição da síntese de gordura do leite e na melhoria do desempenho reprodutivo de vacas. Com o objetivo de avaliar a cana-de-açúcar como sistema biotecnológico para produção de CLA, o gene da isomerase do ácido linoleico de Propionibacterium acnes (pai) foi isolado e clonado, previamente caracterizado em Escherichia coli e, em seguida, utilizado na biolística de calos embriogênicos para regeneração de plantas transgênicas. No sistema procariótico, foi induzida a expressão de pai e a proteína heteróloga foi verificada como uma banda de 50 kDa, porém não houve alteração evidente do perfil de ácidos graxos da bactéria. Na cotransformação de cana-de-açúcar, o vetor pHA9, que contém o gene de seleção da neomicina fosfotransferase (nptII),foi bombardeado com uma das duas construções desenvolvidas com o promotor da poliubiquitina 1 de milho (pUbi1) dirigindo a expressão de pai adicionado ou não de sequência sinal da proteína de reparo de DNA recA para direcionamento para cloroplasto. Das cultivares CTC2 e IACSP9303046, foram obtidas eficiências de transformações de 2,2% e 1,7-7,1%, respectivamente. Um total de 156 plântulas foram regeneradas após regime de seleção com geneticina. Em seguida, 115 plântulas transgênicas foram identificadas por PCR para nptII e, entre essas, 29 e 48 foram PCRpositivas para pai e rec-pai, respectivamente. De 50 plantas aclimatizadas, 12 foram analisadas por Southern blot para nptII e 4 para pai, confirmando-se a transformação genética. Para comprovar a expressão de mRNA de pai, 27 plantas foram averiguadas por RT-PCR e RT-qPCR e indicaram produção de transcritos estudados. A análise de expressão das proteínas de folha por Western blot em 21 plantas selecionadas não produziu resultados conclusivos quanto à detecção de PAI. Essas mesmas foram analisadas por Cromatografia Gasosa, mas não foi detectado acúmulo de CLA. Embora seja possível a introdução e expressão do gene pai em cana-de-açúcar, é necessário avaliar em maior detalhe os fatores que possam afetar positivamente a produção de CLA, como tipo de tecido, compartimentos subcelulares para direcionamento proteico ou coexpressão de fosfolipases
- Imprenta:
- Publisher place: Piracicaba
- Date published: 2010
- Data da defesa: 09.11.2010
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ABNT
BORTOLETO, João Fernando. Modificação genética de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) visando à produção de ácidos graxos conjugados. 2010. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26112010-145918/. Acesso em: 12 jun. 2024. -
APA
Bortoleto, J. F. (2010). Modificação genética de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) visando à produção de ácidos graxos conjugados (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26112010-145918/ -
NLM
Bortoleto JF. Modificação genética de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) visando à produção de ácidos graxos conjugados [Internet]. 2010 ;[citado 2024 jun. 12 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26112010-145918/ -
Vancouver
Bortoleto JF. Modificação genética de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) visando à produção de ácidos graxos conjugados [Internet]. 2010 ;[citado 2024 jun. 12 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26112010-145918/
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