O efeito do AICAR e da Cafeína na expressão do gene do GLUT4 em células C2C12. Ativação dos elementos responsivos: MEF2 binding site, E-Box e TRE (2010)
- Authors:
- Autor USP: MACHADO, UBIRATAN FABRES - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA (HUMANO)
- Language: Português
- Abstract: OBJETIVOS: Investigar se a cafeína e o AICAR (ativador de AMPK)aumentam a expressão de GLUT4, e posteriormente investigar qual é a região do promotor está envolvida neste fenômeno. MÉTODO E RESULTADOS: Células C2C12 foram plaqueadas em placas de 6 poços, a uma concentração de 300.000 células/ poço. 24hs após o plaqueamento, algumas placas foram transfectadas com plasmídeos contendo um fragmento da região promotora do GLUT4 (-502/-420) aonde apresentam as caixas MEF2 binding site (MEF2bs), E-Box e TRE (região denominada GLUT4 enhancer), ou com este mesmo plasmídeo com uma das caixas mutadas (portanto, ao todo 4 plasmídeos diferentes). As células foram cultivadas com DMEN/FBS10% (Fetal Bovine Serum) até atingirem uma confluência de 90%. Após este período as células começaram a ser diferenciadas com DMEN/HS 5% (Horse Serum), por 3 dias até atingirem o formato de miotubos e então foram tratadas com cafeína a 3mM ou com AICAR a 1mM por 3 horas. Após este período as células foram lisadas para extração de mRNA por meio do kit de extração Quiagem® (células que não foram transfectadas, mas que sofreram o mesmo tratamento). As células transfectadastiveram a atividade CAT (Co-acil Acetil Transferase) mensuradas por ELISA através de um kit CAT-ELISA fornecido pela Roche®. Os mRNAs foram analizados por Real Time PCR para quantificar a expressão de GLUT4 e MEF2A. O tratamento com AICAR promoveu um aumento de 100% (P<0,01) na expressão de GLUT4 e de 44% (P<0,05) na expressão de MEF2AA Cafeína promoveu um aumento de 40% (P<0,05) na expressão de GLUT4 e de 55% (P<0,001) na expressão de MEF2A. Os resultados das transfecções mostraram que o tratamento com AICAR e cafeína promoveram respectivamente, aumentos de 40% e 100% na atividade CAT utilizando o plasmídeo GLUT4 enhancer. A mutação de qualquer uma das 3 caixas, levou a uma queda de 50% a 75% (P<0,05) na atividade CAT dos controles. Quando a caixa MEF2bs foi mutada, os tratamentos não surtiram nenhum efeito. A mutação das caixas E-Box e TRE diminuiram a expressão basal, mas responderam positivamente ao tratamento com cafeína em 56% (P<0,05). CONCLUSÃO: Os resultados mostram que o AICAR aumenta a expressão de GLUT4, mas tem pouco impacto na atividade CAT, o que sugere que a AMPK atue em outra região do promotor do GLUT4. Ja a Cafeína promove um aumento discreto na expressão do GLUT4, mas causa um grande impacto na atividade CAT. Além disso, os ensaios utilizando as caixas mutadas mostraram que as 3 caixas são importantes para a ativação total do GLUT4, mas a caixa MEF2bs é essencial no que diz respeito à ativação do gene pela sinalizaçào de cálcio e por AMPK. Quando mutamos as outras duas caixas e mantivemosmos a caixa MEF2 íntegra, mesmo que o resultado basal fosse baixo, o tratamento continou tendo efeito positivo como observado na caixa íntegra (GLUT4 enhancer). Estes dados apontam que a proteína MEF2A é muito importante na resposta da expressão do gene do GLUT4 pela sinalização ativada pela contraçào muscular
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- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental
-
ABNT
LIMA, G. A. e ZORZANO, A. e MACHADO, Ubiratan Fabres. O efeito do AICAR e da Cafeína na expressão do gene do GLUT4 em células C2C12. Ativação dos elementos responsivos: MEF2 binding site, E-Box e TRE. 2010, Anais.. São Paulo: FeSBE, 2010. . Acesso em: 27 abr. 2024. -
APA
Lima, G. A., Zorzano, A., & Machado, U. F. (2010). O efeito do AICAR e da Cafeína na expressão do gene do GLUT4 em células C2C12. Ativação dos elementos responsivos: MEF2 binding site, E-Box e TRE. In Resumos. São Paulo: FeSBE. -
NLM
Lima GA, Zorzano A, Machado UF. O efeito do AICAR e da Cafeína na expressão do gene do GLUT4 em células C2C12. Ativação dos elementos responsivos: MEF2 binding site, E-Box e TRE. Resumos. 2010 ;[citado 2024 abr. 27 ] -
Vancouver
Lima GA, Zorzano A, Machado UF. O efeito do AICAR e da Cafeína na expressão do gene do GLUT4 em células C2C12. Ativação dos elementos responsivos: MEF2 binding site, E-Box e TRE. Resumos. 2010 ;[citado 2024 abr. 27 ] - High salt diet improves insulin sensitivity in pair-weight rats by increasing the glut, independently of leptin and TNF-'arroba' levels
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