Análise glicoproteômica em linhagens celulares: um modelo de melanoma murino (2011)
- Authors:
- Autor USP: MELO, TALITA DINIZ - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: MELANOMA; GLICOPROTEÍNAS; LINHAGEM CELULAR; BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
- Language: Português
- Abstract: Melanoma é um tumor agressivo derivado da transformação de melanócitos devido a mudanças no microambiente dérmico. Neste trabalho foram investigadas, utilizando estratégias proteômicas e glicômicas, TM1 e TM5, duas linhagens celulares de melanoma obtidas a partir de uma linhagem melanocítica, Melan-a, submetida a seqüenciais ciclos de crescimento com ancoragem impedida, mimetizando a progressão de melanomas. As linhagens celulares Melan-a, TM1 e TM5 foram investigadas em quatro níveis distintos, 1) Expressão de proteínas por abordagem de shotgun proteomics; 2) N-glicosilação pelo isolamento de N-glicanas através de tratamento enzimático com PNGase F, permetilação e espectrometria de massas; 3) Incorporação metabólica de análogos de N-Acetil glicosamina-azida (GlcNAz) e N-Acetilmanosamina-azida (ManNAz) e 4) Fosfoproteoma e a suscetibilidade de TM1 e TM5 a intoxicação por metais. A comparação por shotgun proteomics entre as linhagens identificou a presença de proteínas relacionadas ao ciclo celular, metabolismo de carboidratos, regulação biológica e comunicação celular, em mecanismos chave para o surgimento e progressão de câncer. A incorporação metabólica GlcNAz e ManNAz em oligossacarídeos permitiu a inserção de um grupo químico repórter aos glicoconjugados celulares, representando uma poderosa ferramenta para a visualização das células por microscopia, a caracterização da população das células por citometria de fluxo, componentes secretados pelas células (secretoma) e a possibilidade de enriquecimento das glicoproteínas por método de afinidade como biotina-estreptavidina. Oba-Shinjo et al (2006) mostraram que TM1 e TM5 apresentam significativas alterações em glicoconjugados. A caracterização de N-glicanas a partir do extraio protéico total destas linhagens e a incorporação metabólica de azido-açúcares N-acetilglucosamina (GlcNAz) e N-acetilmanosamina (ManNAz) indicou maiorabundância de glicoformas do tipo híbrido/complexo de alta massa molecular em TM5 comparado a TM1 e Melana. A citometria de fluxo utilizando Alexa-fluor 488 mostrou que GlcNAz foi incorporado mais eficientemente em TM 1 e TM5 comparado as células não tumorigênicas, Melan-a. Entretanto ManNaz, precursor de ácido siálico, foi incorporada na mesma proporção pelas três linhagens celulares. Adicionalmente, glicoproteínas marcadas com azido-açúcar e secretadas para o meio de cultura detectadas através de dot-blot indicaram uma marcação mais intensa em TM5 e TM1 respectivamente, sugerindo uma maior secreção de glicoproteínas pelas células de melanoma. Análises do fosfoproteoma, realizada por nosso grupo, indicaram que as células transformadas TM1 e TM5 acumularam um maior número de fosfoproteínas identificadas via seus fosfopeptídeos com função biológica de ligantes a metais. Ensaios de proliferação em Melan-a, TM1 e TM5 submetidas à exposição de diferentes concentrações de Zn, Co e Cu mostraram que TM1 e TM5 foram mais suscetíveis a intoxicação por metais do que Melan-a.. Dessa forma, as investigações de modificações pós-traducionais como glicosilação e fosforilação de proteínas utilizando estratégia proteômica e incorporação metabólica de azido-açúcares abrem possibilidades para um melhor entendimento do fenótipo maligno adquirido por TM1 e TM5
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2011
- Data da defesa: 18.02.2011
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ABNT
MELO, Talita Diniz. Análise glicoproteômica em linhagens celulares: um modelo de melanoma murino. 2011. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011. . Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Melo, T. D. (2011). Análise glicoproteômica em linhagens celulares: um modelo de melanoma murino (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Melo TD. Análise glicoproteômica em linhagens celulares: um modelo de melanoma murino. 2011 ;[citado 2024 maio 21 ] -
Vancouver
Melo TD. Análise glicoproteômica em linhagens celulares: um modelo de melanoma murino. 2011 ;[citado 2024 maio 21 ]
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