Investigaçao de efeitos imunomoduladores de veneno bruto de Tityus serrulatus sobre funções de linfócitos T humanos (2012)
- Authors:
- Autor USP: MARTINS, ANDREA CASELLA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: S/D
- Subjects: ADJUVANTES IMUNOLÓGICOS; IMUNOFENOTIPAGEM; LINFÓCITOS T; PROLIFERAÇÃO CELULAR; CITOCINAS; VENENOS DE ORIGEM ANIMAL
- Keywords: citocinas; imunofenotipagem; imunomodulação; Tityus serrulatus; animal venoms; cell proliferation; cytokines; immunomodulation; immunophenotyping; T lymphocytes; Tityus serrulatus
- Language: Português
- Abstract: Escorpiões da família Buthidae estão envolvidos na maioria dos envenenamentos em todo o mundo. Tityus é um dos géneros dessa família, sendo Tityus serrulatus a espécie mais perigosa, por estar envolvida em envenenamentos graves, nos quais as vitimas são crianças, podendo levar a óbito. As manifestações da picada incluem dor local, hipersensibilidade, hipertensão, manifestações cardiovasculares e edema pulmonar. A peçonha do T. serrulatus contem, entre outros componentes, várias faxinas que atuam em canais de K+, Na+ e Ca2+ e que são responsáveis pelos efeitos tóxicos do veneno. Estudos recentes mostraram que a peçonha de T. serrulatus pode ativar macrófagos que são criticas na resposta imune e desempenham papel fundamental na resposta humoral e celular. Entretanto, pouco se conhece sobre os efeitos diretos dessas peçonhas sobre linfócitos humanos. Considerando que a modulação de funções celulares como proliferação, ativação e produção de citocinas pode desempenhar papel importante em envenenamentos, o presente estudo propôs: a) avaliar o efeito citotóxico do veneno bruto de Tityus serrulatus (VTs) sobre células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC); b) analisar o efeito do VTs sobre a modulação da expressão de marcadores fenotipicos (CD3, CD4, CD8 e CD19) e de marcadores de ativação celular, incluindo CD69, CD25 e HLA-DR em células T e B; c) avaliar o efeito do VTs sobre a proliferação de linfócitos T; d) avaliar a capacidade do VTs em modular a produção de citocinas pelas PBMC. Ensaios de citotoxicidade foram realizados pela técnica do MTT (3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) e mostraram que as concentrações de 500, 1000 e 2000 µg/mL do VTs apresentaram citotoxicidade baixa a moderada para PBMC (12,7, 22,2 e 23,7% de redução na viabilidade celular, respectivamente). Concentrações de 25, 50e 100 µg/mL não foram citotóxicas. Com base nesses ensaios, estas ultimas concentrações foram utilizadas nos ensaios subsequentes. A citometria de fluxo foi empregada para avaliação da proliferação celular, da expressão de marcadores fenotipicos e de ativação celular, bem como para a quantificação de citocinas nos sobrenadantes de culturas celulares. As concentrações utilizadas não induziram alterações significativas nas subpopulações de linfócitos e não modificaram a expressão de marcadores de ativação em linfócitos T CD4+, CD8+ e B, após 24h de cultivo. O ensaio de proliferação celular, utilizando marcação concomitante com diacetato carboxifluoresceina succinimidyl ester (CFSE) e anticorpos monoclonais contra marcadores fenotipicos e marcadores de ativação celular, permitiu que se avaliasse não só a proliferação, mas a discriminação das diferentes subpopulações celulares e o estado de ativação das mesmas após 96h de cultivo. Os resultados sugerem que o VTs inibe a proliferação de linfócitos estimulados com fitohemaglutinina (PHA), e em especial a porcentagem de linfócitos T CD8+CD25+ (linfócitos T citotóxicos ativados). O VTs não foi capaz de induzir proliferação celular. Em contraste, o VTs quando adicionado isoladamente à cultura de PBMC, nas concentrações de 50 e 100 µg/mL induziu a produção de IL-6 (p˂0,05 e p˂~O,01, respectivamente), uma citocina pró-inflamatória que desempenha papeis importantes nas respostas imunes inata e adaptativa. A secre,cão aumentada de IL-ó, portanto, não está vinculada a aumento na proliferação celular. A presença do VTs concomitantemente à PHA apresentou tendência para inibic,ão da produção de citocinas por células estimuladas com a PHA, como IL-10, TNF e IFN-gama. Os resultados superem que o VTs é uma fonte potencial de substâncias com ações imunomoduladoras sobrelinfócitos T humanos e estimulam novas investiga,cões para o esclarecimento dos mecanismos de ação envolvidos, incluindo estudos que considerem a participação dos canais iônicos de linfócitos T nos fenómenos observados. Essas investigações, juntamente com a identificação dos componentes da peçonha, responsável pela atividades observadas, poderão contribuir para a descoberta de ferramentas para estudo dos mecanismos fisiopatológicos do envenenamento, bem como para a descoberta de novas alternativas de tratamento para doenças mediadas pelo sistema imune
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2012
- Data da defesa: 03.02.2012
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ABNT
MARTINS, Andréa Casella. Investigaçao de efeitos imunomoduladores de veneno bruto de Tityus serrulatus sobre funções de linfócitos T humanos. 2012. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2012. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-28062012-143733/. Acesso em: 09 maio 2024. -
APA
Martins, A. C. (2012). Investigaçao de efeitos imunomoduladores de veneno bruto de Tityus serrulatus sobre funções de linfócitos T humanos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-28062012-143733/ -
NLM
Martins AC. Investigaçao de efeitos imunomoduladores de veneno bruto de Tityus serrulatus sobre funções de linfócitos T humanos [Internet]. 2012 ;[citado 2024 maio 09 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-28062012-143733/ -
Vancouver
Martins AC. Investigaçao de efeitos imunomoduladores de veneno bruto de Tityus serrulatus sobre funções de linfócitos T humanos [Internet]. 2012 ;[citado 2024 maio 09 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-28062012-143733/
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