Caracterização funcional e estrutural da hialuronidase isolada da peçonha de serpente Crotalus durissus terrificus (2012)
- Authors:
- Autor USP: BORDON, KARLA DE CASTRO FIGUEIREDO - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: S/D
- Subjects: SERPENTES; CROTALIDAE; ENZIMAS (ISOLAMENTO E PURIFICAÇÃO); PROTEÍNAS; VENENOS; FOSFOLIPASES A
- Keywords: antiedematogenic activity; atividade antiedematogênica; cristalografia de proteína; Crotalus durissus terrificus; Crotalus durissus terrificus; estudos cinéticos; fosfolipase A2; hialuronidase; hyaluronidase; kinetic studies; peçonha; phospholipase A2; protein crystallography; venom
- Language: Português
- Abstract: Hialuronidases são responsáveis pela hidrólise de hialuronan, o principal componente da matriz intersticial. Estas enzimas são ubíquas nas peçonhas de serpentes, contudo suas concentrações e características podem variar entre as espécies. Embora estudos indiquem a presença de atividade hialuronidásica na peçonha de Crotalus durissus terrificus e a hialuronidase apresente importante papel no envenenamento local e sistêmico, a enzima ainda não havia sido estudada. Os objetivos deste trabalho focaram o isolamento e a caracterização funcional e estrutural da hialuronidase (CdtHya1) presente na peçonha de serpente Crotalus durissus terrificus. CdtHya1 foi purificada por cromatografia de troca iônica seguida de filtração molecular e interação hidrofóbica (recuperação proteica = 0,23%), consistindo no primeiro estudo de isolamento e caracterização de uma hialuronidase crotálica. Os 44 primeiros aminoácidos do seu N-terminal foram determinados por degradação de Edman e mostraram compartilhar um elevado grau de identidade sequencial com outras hialuronidases depositadas em bancos de dados. CdtHya1 é uma glicoproteína e apresentou atividade máxima a 37°C, pH 5,5 e na presença de NaCl 0,2 mol/L. Seu monômero de 64,5 kDa foi estimado por SDS-PAGE sob condições redutoras. A atividade específica da peçonha solúvel foi 145 unidades turbidimétricas reduzidas por miligrama (UTR/mg), contra 5.066 UTR/mg para CdtHya1. A enzima apresentou Kcat de 3.781,0 min-1 sobre hialuronan e em torno de 400 min-1 sobre os sulfatos de condroitina A, B e C, indicando maior atividade sobre hialuronan. Cátions divalentes (Ca2+ e Mg2+) e NaCl 1 mol/L reduzem significativamente a atividade enzimática. A enzima pura (32 UTR/40 ?L) diminuiu o edema provocado pela injeção subplantar de tampão, crotoxina ou fosfolipase A2 (PLA2), aumentando a difusão destes pelos tecidos dos camundongos. CdtHya1potencializou a ação da crotoxina, como evidenciado pela morte de camundongos até o final do ensaio de edema de pata. A enzima nativa pura foi submetida a ensaios cristalográficos preliminares onde foram obtidos os primeiros cristais, constituindo assim um passo importante para a determinação da primeira estrutura tridimensional de hialuronidase de peçonha de serpente. Este estudo relata o procedimento de purificação da CdtHya1, a primeira hialuronidase isolada de peçonhas crotálicas com alta atividade antiedematogênica
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2012
- Data da defesa: 02.07.2012
-
ABNT
BORDON, Karla de Castro Figueiredo. Caracterização funcional e estrutural da hialuronidase isolada da peçonha de serpente Crotalus durissus terrificus. 2012. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2012. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-04092012-161625/. Acesso em: 05 jun. 2024. -
APA
Bordon, K. de C. F. (2012). Caracterização funcional e estrutural da hialuronidase isolada da peçonha de serpente Crotalus durissus terrificus (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-04092012-161625/ -
NLM
Bordon K de CF. Caracterização funcional e estrutural da hialuronidase isolada da peçonha de serpente Crotalus durissus terrificus [Internet]. 2012 ;[citado 2024 jun. 05 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-04092012-161625/ -
Vancouver
Bordon K de CF. Caracterização funcional e estrutural da hialuronidase isolada da peçonha de serpente Crotalus durissus terrificus [Internet]. 2012 ;[citado 2024 jun. 05 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-04092012-161625/ - Géis de quitosana para a liberação prolongada intrabolsa periodontal de metronidazol para o tratamento da periodontite
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