Imobilização da enzima butirilcolinesterase e o desenvolvimento de métodos de triagem para inibidores seletivos (2013)
- Authors:
- Autor USP: VILELA, ADRIANA FERREIRA LOPES - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: ENZIMAS; INIBIDORES DE ENZIMAS
- Keywords: Butirilcolinesterase; Ensaios de inibição enzimática; Imobilização de enzimas; Inibidores seletivos; Butyrylcholinesterase; Enzymatic inhibition assays; Immobilized enzymes; Selective inhibitor
- Language: Português
- Abstract: A descoberta de inibidores seletivos é extremamente importante para o desenvolvimento de novos fármacos que possam ser usados no tratamento de pacientes diagnosticados com a doença de Alzheimer (DA). Neste contexto, o desenvolvimento de métodos de triagem para a identificação de novos compostos biologicamente ativos se torna interessante. Butirilcolinesterase (BChE, EC 3.1.1.8) é uma serina hidroxilase que está classicamente associada à hidrólise do neurotransmissor acetilcolina (ACh) formando colina e ácido acético. Este trabalho descreve a imobilização covalente da BChE de soro humano nas paredes internas de capilares de sílica fundida utilizando o agente espaçador glutaraldeído, e sua aplicação na triagem de inibidores seletivos. O ICER-BChE resultante foi conectado a um sistema de cromatografia líquida de alta eficiência com monitoramento on line da atividade catalítica, envolvendo detecção UV. Após os estudos das melhores condições cromatográficas, variações de pH e vazão e a influência de solventes orgânicos na atividade enzimática o método foi validado com o uso de inibidores padrões. O maior valor obtido com o ICER-BChE no parâmetro cinética, constante de Michaelis KM = 33,6 ± 6,9 mM, comparado com a enzima em solução, KM = 0,12 ± 0,02 mM, evidencia o efeito da imobilização sobre a afinidade pelo substrato. No entanto, houve retenção da atividade catalítica e seletividade frente a inibidores padrão. O método foi aplicado na triagem de novos ligantes utilizando cinco coleções de diferentes classes de compostos, entre derivados cumarinicos, complexos metálicos com cobre (Cu), complexos metálicos com cobalto (Co) e zinco (Zn), glicosídeos, e derivados de fenilpropanóides e ácido barbitúrico. Desta triagem foram selecionados sete compostos promissores com os quais foram realizados os estudos sobre a potência mínima inibitória (‘IC IND 50’) e destes quatro foramescolhidos para estudos de mecanismos de ação utilizando o ICER-BChE. Dos complexos metálicos os melhores compostos foram o HPTBCu (‘IC IND 50’ = 8,74 ± 1,5 ‘mü’M, ‘K IND. i’ = 9,6 ± 0,5 ‘mü’M), o NarBCu (‘IC IND 50’ = 8,0 ± 1,4 ‘mü’M, ‘K IND. i’ = 2,0 ± 0,1 ‘mü’M) ambos com mecanismo competitivo o HesFCu (‘IC IND 50’ = 13,6 ± 2,9 ‘mü’M), o NNINABCu (‘IC IND 50’ = 94,8 ± 16) e o NarFCu (‘IC IND 50’ = 81,7 ± 13). Dos derivados cumarínicos os compostos 17 (‘IC IND 50’ =109 ± 21 ‘mü’M, ‘K IND. i’ = 108 ± 10 ‘mü’M) e 19 (‘IC IND 50’ =128 ± 28 ‘mü’M, ‘K IND. i’ =36.0 ± 5.0 ‘mü’M) apresentaram mecanismo incompetitivo. Os resultados demonstraram que a abordagem proposta é útil na triagem on line de inibidores seletivos, pois fornece resultados rápidos, precisos e reprodutíveis
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
- Data da defesa: 22.02.2013
-
ABNT
VILELA, Adriana Ferreira Lopes. Imobilização da enzima butirilcolinesterase e o desenvolvimento de métodos de triagem para inibidores seletivos. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26022019-114703/. Acesso em: 29 maio 2024. -
APA
Vilela, A. F. L. (2013). Imobilização da enzima butirilcolinesterase e o desenvolvimento de métodos de triagem para inibidores seletivos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26022019-114703/ -
NLM
Vilela AFL. Imobilização da enzima butirilcolinesterase e o desenvolvimento de métodos de triagem para inibidores seletivos [Internet]. 2013 ;[citado 2024 maio 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26022019-114703/ -
Vancouver
Vilela AFL. Imobilização da enzima butirilcolinesterase e o desenvolvimento de métodos de triagem para inibidores seletivos [Internet]. 2013 ;[citado 2024 maio 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26022019-114703/ - Co-imobilização das enzimas acetilcolinesterase e β-secretase1: estudo de condições para triagem de ligantes
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