Avaliação do impacto da implantação do controle de qualidade em um banco de amostras teciduais criopreservadas (2013)
- Authors:
- Autor USP: VIANA, CRISTIANO RIBEIRO - FM
- Unidade: FM
- Sigla do Departamento: MPT
- Subjects: TECIDOS (ANATOMIA); CONTROLE (TEORIA DE SISTEMAS E CONTROLE); DNA; FENÔMENOS BIOQUÍMICOS; ISQUEMIA; CRIOPRESERVAÇÃO
- Keywords: Banco de tecidos; Cold ischemia; Controle de qualidade; Criopreservação; Cryopreservation; Degradação do RNA; Isquemia fria; Quality control; RNA degradation; Tissue bank
- Language: Português
- Abstract: Bancos de tumores foram criados para organizar a coleta, arm azenamento e distribuição de amostras biológicas de pacientes oncológicos, favorecendo seu uso nas pesquis as sobre o câncer. Amostras ade quadas devem ter RNA, DNA e proteínas de boa qualidade. RNA de boa qualidade deve estar íntegro e puro e DNA deve ter boa concentração e pur eza. Basea do em norm as in ternacionais, f oi elaborado e implantado um abrangente sistema de controle de qualidade no banco de tumores do Hospital de Câncer de Barretos, que para fins de estudo foi dividido em banco pré-controle de qu alidade (denominado banco pré) e em ban co pós- controle de qualidade (denominado banco pós). Objetivando comparar a qualidade das amostras n os dois bancos, atra vés d a extração d e RNA total e d e DNA (utilizando-se homogeneizador de tecidos e Kits), selecionou-se de forma aleatória 200 a mostras tumorais, distribuídas ig ualitariamente entre mama, co lorreto, estômago, pulmão e tireóide, sendo 100 do banco pré e 100 do banco pós. Para se avaliar a influência do tempo de isquemia fria (tempo entre a excisão do e spécime cirúrgico e o congelamento rápido da amostra armazenada) na qualidade do RNA total de amostras tumorais do banco pós, foram coletadas 200 amostras tumorais, distribuídas igualitariamente entre mama, colorreto, estômago, pulmão e ti reóide, de 100 doadores diferentes, metade com o tempo de isquemia fria (TIF) de até 30 minutos e a o utra metade do mesmo espécime com TIF de 45 minutos.Extraiu-se RNA total dessas amostras (com maceração manual e Trizol) e comparou-se a sua qualidade, através do núm ero de i ntegridade do RNA (RIN), dentr o dos d ois intervalos de tempo e nas diferentes top ografias. Ao comparar-se amostras com RIN acima de 7 (consideradas ideais para experimentos de microarray), do banco pré e do banco pós, for amencontrados 73 (73%) no primeiro e 87 (87%) no segundo (p=0,013). Ao comparar-se o intervalo de TIF de até 30 minutos com o de 45 minutos, encontrou-se respectivamente 63 (64,3%) e 3 6 (36%) amostras com RNA total intacto, 11 (11,2%) e 17 (17 %) com RNA tot al parcialmente degradado e 24 (24, 5%) e 47 (47%) com RNA t otal degradado (p<0,001). Amostras tireoidianas e colorretais f oram mais sensíveis ao aumento d o T IF (p=0,006 e p=0,03, respectivamente), e as de estômago e pulmão menos sensíveis (p=0,919 e p=0,384, resp ectivamente). Ao comparar-se a s 200 amostras dos dois ban cos, constatou-se que a grande maioria apresentava boa qualidade, porém o banco pós se destacou ao avaliar-se o número de amostras ideais para estudos de microarray, por provável interferência d o TIF, ainda não controlado no banco pr é. Constatou-se também que algumas amostras do banco pré, armazenadas há mais de ci nco anos em freezer a -80ºC, apresentaram excelente qualidade. O presente estudo também mostrou que o TIF é muito importante para a preservação da qualidade do RNA total, por isso, deve-se sempre respeitar o tempo máximo de 30 minutos. Ainda se observou que a de gradação do RNA é tecido dependente e qu e amostras processadas com homogeneizador de tecidos e extraídas com RNeas y Mini Kit apresentaram melhor q ualidade do RNA, qu e as macer adas manualmente e extraídas com Trizol
- Imprenta:
- Data da defesa: 11.04.2013
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ABNT
VIANA, Cristiano Ribeiro. Avaliação do impacto da implantação do controle de qualidade em um banco de amostras teciduais criopreservadas. 2013. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-28052013-105525/. Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Viana, C. R. (2013). Avaliação do impacto da implantação do controle de qualidade em um banco de amostras teciduais criopreservadas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-28052013-105525/ -
NLM
Viana CR. Avaliação do impacto da implantação do controle de qualidade em um banco de amostras teciduais criopreservadas [Internet]. 2013 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-28052013-105525/ -
Vancouver
Viana CR. Avaliação do impacto da implantação do controle de qualidade em um banco de amostras teciduais criopreservadas [Internet]. 2013 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-28052013-105525/
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