Cultivos de células animais visando a altas concentrações celulares: processo em perfusão e suplementação com aminoácidos (2013)
- Authors:
- Autor USP: COSTA, BRUNO LABATE VALE DA - EP
- Unidade: EP
- Sigla do Departamento: PQI
- Subjects: CULTURA DE CÉLULAS ANIMAIS; METABOLISMO CELULAR; BIOPROCESSOS
- Language: Português
- Abstract: Células animais são alvo de pesquisas visando sua utilização como plataforma para a expressão de proteínas recombinantes, desde vacinas veterinárias até fatores de coagulação para hemofílicos. Independente da estratégia de cultivo utilizada, altas concentrações celulares são em geral associadas a uma maior produção da proteína de interesse. O objetivo deste trabalho foi o de investigar estratégias que possibilitariam o cultivo de células animais em concentrações mais altas do que as obtidas até o momento. Células de inseto Drosophila melanogaster S2 produtoras da glicoproteína do vírus da raiva foram cultivadas em frascos agitados a 100 rpm e 28°C, em meio livre de soro SF 900 II suplementado com os aminoácidos asparagina, cisteína, prolina e serina. Os perfis de crescimento celular indicaram que a adição de um pool dos quatro aminoácidos no meio de cultura refletiu numa concentração celular máxima (Xv MÁX) 16% maior, e que a velocidade específica máxima (µMÁX) de crescimento celular foi 56% mais alta quando cisteína foi adicionada isoladamente no meio de cultura. A adição deste aminoácido também foi responsável por um metabolismo de glicose mais eficiente. Os resultados indicam que cisteína é provavelmente substrato limitante do cultivo de células S2AcGPV em meio Sf 900 II. Já células de mamífero BHK-21 (C13), adaptadas ao crescimento em suspensão, foram cultivadas em processo de perfusão, processo contínuo em que há retenção celular, o que permite alcançar concentrações celulares mais altas que processos em batelada ou em modo contínuo sem retenção celular. Foi utilizado um biorreator do tipo tanque agitado com 1,5 L de volume de trabalho e spin-filter interno, com poro de diâmetro igual a 10 µm, acoplado ao eixo do impelidor.Durante o cultivo, o pH foi controlado em 7,2, a agitação em 80 rpm, a temperatura em 37°C e o oxigênio dissolvido em 50% da saturação com o ar. A concentração celular máxima alcançou 15,7 x 10⁶ céls mL-¹, com viabilidade foi superior a 90% durante os 48 dias de cultivo, muito superior à do cultivo em batelada (aproximadamente 5 x 10⁶ céls mL-¹). As velocidades específicas de consumo de substratos e de produção de metabólitos na fase batelada do cultivo em perfusão foram superiores às observadas no cultivo em batelada, provavelmente devido ao estresse causado pela rotação do spin-filter. O coeficiente de manutenção celular durante a perfusão não foi desprezível, e a manutenção representou grande parte do consumo de substrato nessa fase. Na perfusão, a concentração celular foi cerca de 3 vezes maior do que no cultivo contínuo sem reciclo de células. Provou-se que é possível realizar cultivos em perfusão em escala laboratorial com células de mamífero BHK-21 obtendo alta concentração celular.
- Imprenta:
- Data da defesa: 20.03.2013
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ABNT
COSTA, Bruno Labate Vale da. Cultivos de células animais visando a altas concentrações celulares: processo em perfusão e suplementação com aminoácidos. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-24122013-112802/. Acesso em: 30 abr. 2024. -
APA
Costa, B. L. V. da. (2013). Cultivos de células animais visando a altas concentrações celulares: processo em perfusão e suplementação com aminoácidos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-24122013-112802/ -
NLM
Costa BLV da. Cultivos de células animais visando a altas concentrações celulares: processo em perfusão e suplementação com aminoácidos [Internet]. 2013 ;[citado 2024 abr. 30 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-24122013-112802/ -
Vancouver
Costa BLV da. Cultivos de células animais visando a altas concentrações celulares: processo em perfusão e suplementação com aminoácidos [Internet]. 2013 ;[citado 2024 abr. 30 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-24122013-112802/ - Using statistical tooks for improveing bioprocesses
- Using statistical tools for improving bioprocesses
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