Caracterização da superexpressão do fator sigma ECF ´σPOT.x´ em Pseudomonas aeruginosa PA14 (2013)
- Authors:
- Autor USP: BORGES, ANA LAURA BOECHAT - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; BACTÉRIAS; LIPÍDEOS (BIOSSÍNTESE)
- Language: Português
- Abstract: Pseudomonas aeruginosa é uma proteobactéria do grupo gama muito versátil, capaz de colonizar ambientes variados e infectar hospedeiros filogeneticamente distintos, incluindo humanos imunocomprometidos. Os fatores sigma de função extracitoplasmática (ECF) são membros de sistemas de sinalização de superfície celular (CSS), abundantes em P. aeruginosa. Vinte genes codificando fatores sigma ECF estão presentes nos genomas sequenciados de P. aeruginosa, a maioria fazendo parte de sistemas TonB relacionados à captação de ferro. Neste trabalho, seis fatores sigma pobremente caracterizados foram superexpressos na linhagem PA14 a partir de um promotor induzível por arabinose para investigar seu papel na expressão dos sistemas de dois componentes PvrSR e RcsCB, que atuam na regulação da fímbria CupD, além de sua influência no crescimento de culturas de P. aeruginosa. Não foi observado efeito positivo de nenhum dos fatores sigma testados na expressão dos sistemas de dois componentes e a superexpressão de cinco deles tampouco levou a qualquer alteração no crescimento, porém a produção de piocianina foi alterada na superexpressão de PA14_55550 e a superexpressão de PA14_26600 e PA14_46810 levou a um discreto aumento no início da formação de biofilme em PA14. Por outro lado, culturas superexpressando ´σPOT.x´ (ALB04) apresentaram um perfil alterado de lipopolissacarídeo e uma curva de crescimento bifásica, alcançando precocemente uma fase estacionária seguida de uma recuperação do crescimento até uma segunda fase estacionária. Durante a primeira fase estacionária, a maior parte das células aumenta de tamanho e morre, mas as células remanescentes retornam à morfologia selvagem e seguem para a segunda fase de crescimento exponencial. Isso não acontece devido a mutações compensatórias, uma vez que células coletadas de pontos tardios da curva e diluídas em meio novo repetem este comportamento. Apesar de trabalhos com alinhagem PAO1 associarem ´σPOT.x´ à transcrição de oprF, que codifica a principal porina não específica de Pseudomonas, nas condições dos nossos ensaios em PA14 a expressão dessa porina não foi induzida pela superexpressão de ´σPOT.x´. Assim, os efeitos observados nessa superexpressão também não podem ser atribuídos a OprF. A transcrição de oprF em PA14 mostrou-se majoritariamente dependente da região promotora a que se atribui a ligação de ´σPOT.70´, ao contrário dos relatos na literatura da dependência da região de ligação a ´σPOT.x´. Análises proteômicas foram realizadas para investigar os elementos envolvidos nesses efeitos de superexpressão de ´σPOT.x´, o que revelou a indução de diversas enzimas envolvidas na via de biossíntese de ácidos graxos. As células superexpressando ´σPOT.x´ apresentam uma maior proporção de ácidos hexadecanoico (C16) e hexadecenoico (C16:1) e dados de anisotropia mostram uma maior fluidez da(s) membrana(s). Este trabalho é o primeiro relato de um fator sigma ECF envolvido em biossíntese de lipídeos em P. aeruginosa
- Imprenta:
- Data da defesa: 05.07.2013
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ABNT
BOECHAT BORGES, Ana Laura. Caracterização da superexpressão do fator sigma ECF ´σPOT.x´ em Pseudomonas aeruginosa PA14. 2013. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-06082013-083551/. Acesso em: 15 maio 2024. -
APA
Boechat Borges, A. L. (2013). Caracterização da superexpressão do fator sigma ECF ´σPOT.x´ em Pseudomonas aeruginosa PA14 (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-06082013-083551/ -
NLM
Boechat Borges AL. Caracterização da superexpressão do fator sigma ECF ´σPOT.x´ em Pseudomonas aeruginosa PA14 [Internet]. 2013 ;[citado 2024 maio 15 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-06082013-083551/ -
Vancouver
Boechat Borges AL. Caracterização da superexpressão do fator sigma ECF ´σPOT.x´ em Pseudomonas aeruginosa PA14 [Internet]. 2013 ;[citado 2024 maio 15 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-06082013-083551/
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