Caracterização fenotípica e funcional da nova mutação p.M40K na adiponectina (2013)
- Authors:
- Autor USP: ARRUDA, ANA CAROLINA BUENO DE QUEIROZ - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RPP
- Subjects: MUTAÇÃO GENÉTICA; ADIPONECTINA
- Language: Português
- Abstract: Introdução: A adiponectina tem efeitos pleiotrópicos de sensibilização insulínica e ações anti-inflamatória e antiaterosclerótica. A adiponectina é encontrada em três isoformas: triménca hexamérica e de alto peso molecular (HMW), sendo esta considerada a mais biologicamente relevante. Dentre as poucas mutações descritas em seu gene (ADIPOQ) nenhuma teve seu impacto fenotípico avaliado precocemente, antes do diagnóstico do diabete melito tipo 2 (DM2). Objetivo: caracterizar fenotipicamente e funcionalmente a nova mutação gênica ADIPOQ p.M40K. Indivíduos e Métodos: Detectamos, em estudo prévio, em uma coorte de 710 adultos jovens (23-25 anos de idade) seguidas desde o nascimento um subgrupo de 14 indivíduos hipoadiponectinêmicos (2,2±0,6 μg/mL; VR: 3-30). Foi realizado o sequenciamento do gene ADIPOQ neste grupo e detectada a nova mutação c.T119A/p.M40K. Os familiares disponíveis do caso-índice (n=7) e 2 grupos de indivíduos saudáveis (n=200) também foram investigados. A avaliação fenotípica do caso-índice foi repetida aos 31 e 34 anos de idade. O transgene mutante murino p.M43K sinônimo da mutação humana p.M40K foi desenvolvido por meio de mutagênese sítio-dirigida do gene Adipoq e as proteínas recombinantes nativa e mutante foram expressas em células HEK293Tet-On3G. Foi analisada a expressão gênica relativa do gene ADIPOQ e seus receptores ADIPOR1/R2 no tecido adiposo do caso-índice e as proteínas humana e recombinante foram avaliadas por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida e imunodetecção em diferentes condições de redução e desnaturação térmica. A ação da adiponectina p.M43K foi avaliada em ensaios de ativação da ceramidase em fibroblastos murinos transgênicos knockout para os receptores da adiponectina (AdipoRl ‘POT.-/-‘ ou AdipoR2 ‘POT.-/-‘) e ativação da via AMPK em miotubos murinos ‘C IND. 2’C IND.12’. Resultados: A novamutação heterozigota ADIPOQ p.M40K foi identificada em um adulto jovem hipoadiponectinêmico (2,4μg/mL) e com deficiência seletiva de adiponectina HMW (0,24μg/mL=10%), além de 3 de seus familiares. Os carreadores apresentaram redução significativa da porcentagem da isoforma HMW (HMW%) quando comparados aos controles (9,4±1 vs. 56,6±13%; P<0,05) e aos familiares não-carreadores (9,4±1 vs. 42±0,5%; P=0,05). O gene ADIPOQ e a sua proteína se encontraram relativamente hiperexpressos no tecido adiposo do caso-índice (2,3 e 1,6 vezes, respectivamente), enquanto a %HMW se encontrava 3,3 vezes reduzida. Observou-se repressão da expressão dos receptores ADIPOR1 e ADIPOR2 (-6 e -1,2 vezes). A adiponectina p.M43K apresentou redução da %HMW de maneira alelo-mutante dosedependente (P<0,05). Os ensaios funcionais demonstraram que não existe diferença na fosforilação da AMPK (P=0,7) e ACC (P=0,82) em células musculares aos 5 minutos de tratamento com a adiponectina nativa e p.M43K. Observou-se um possível prejuízo da adiponectina p.M43K em ativar a via da ceramidase em células que expressam apenas o ADIPOR2. Do ponto de vista fenotípico, a hipoadiponectinemia se associou a restrição de crescimento intrauterino, obesidade de início na adolescência; resistência insulínica (HOMA-IR: 4,7) e dislipidemia aos 25 anos. No início da quarta década de vida, o caso-índice apresentava hipertensão arterial grave (180/120mmHg), esteatose hepática grave (gordura: 40±6%), espessamento da íntima-média carotídea e DM2 aos 34 anos de idade. Todos os familiares carreadores da mutação p.M40K também apresentaram características de síndrome metabólica. Conclusão: a nova mutação ADIPOQ p.M40K resulta em grave hipoadiponectinemia devido deficiência da isoforma HMW e está associada com o desenvolvimento precoce da síndrome metabólica
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
- Data da defesa: 07.11.2013
-
ABNT
ARRUDA, Ana Carolina Bueno de Queiroz. Caracterização fenotípica e funcional da nova mutação p.M40K na adiponectina. 2013. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. . Acesso em: 09 jun. 2024. -
APA
Arruda, A. C. B. de Q. (2013). Caracterização fenotípica e funcional da nova mutação p.M40K na adiponectina (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Arruda ACB de Q. Caracterização fenotípica e funcional da nova mutação p.M40K na adiponectina. 2013 ;[citado 2024 jun. 09 ] -
Vancouver
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