Estudos estruturais e funcionais da Selenofosfato Sintetase de Trypanosoma brucei e Leishmania major (2014)
- Authors:
- Autor USP: FAIM, LíVIA MARIA - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FCI
- Subjects: SELÊNIO; PROTEÍNAS (SÍNTESE); ENZIMAS (ESTUDO;ESTRUTURA); TRYPANOSOMA; LEISHMANIA
- Keywords: Selênio; Selenocisteína; Selenofosfato sintetase; SPS2
- Language: Português
- Abstract: A síntese e incorporação de Selenocisteína em selenoproteínas ocorre co tradicionalmente direcionado pelo códon de terminação UGA. Uma maquinaria única de enzimas e fatores proteicos é necessária para síntese de selenocisteína e decodificação do códon UGA de terminação da tradução para inserção de selenocisteína. Dentre as enzimas envolvidas, está a Selenonofosfato sintetase (SPS2), responsável por catalisar a ativação de seleneto com adenosina 5 trifosfato (ATP) para gerar selenofosfato, o doador de selênio reativo que é substrato da próxima enzima da via para formação de selenocisteína. Estudos recentes identificaram a presença da via de biossíntese de selenocisteína em parasitas kinetoplastidas e subsequentemente a proteína SPS2 de Trypanosoma brucei e Leishmania major foram caracterizadas. Entretanto, trabalhos estruturais e funcionais das enzimas permaneceram não reportados. Dessa forma, este trabalho teve seu foco estabelecido na realização de estudos estruturais e funcionais da SPS2 de T. brucei e L. major. Para caracterização da proteína em solução foram empregadas as técnicas de cromatografia de exclusão de tamanho, eletroforese em gel nativo, espalhamento dinâmico de luz (DLS), espalhamento de Raios X a baixo ângulo (SAXS) e ultracentrifugação analítica (AUC). Os resultados obtidos revelaram uma mistura de dímeros e tetrâmeros em solução para ambas SPS2 com predominância de dímeros. Muitas estratégias de cristalização e melhorias na difração foram utilizadas paraobtenção de cristais proteicos apropriados para determinação da estrutura cristalográfica das SPS2. Cristais de SPS2 de T. brucei inteira e SPS2 de L. major com N-terminal truncado foram obtidos. Porém, somente a estrutura cristalográfica da proteína SPS2 de Leishmania major com o N-terminal truncado a 1,9 Å de resolução foi determinada. Estudos comparativos entre esta estrutura e outras selenofosfato sintetases mostrou a mesma organização estrutural entre elas. Experimento de complementação funcional das SPS2 truncadas e mutadas pontualmente revelou três resíduos localizados no N-terminal como fundamentais para atividade da SPS2 (Leu33, Thr34; Tyr36 e Leu37, Thr38; Tyr40 para SPS2 de T. brucei e L.major, respectivamente). Análise mutacional baseada nas estruturas cristalográficas indicou que estes resíduos podem estar envolvidos no mecanismo de entrega do selenofosfato para a próxima enzima da via, a Selenocisteína sintase. Isto poderia evitar a difusão de compostos reativos de selênio, resultando em uma eficiência na síntese de selenocisteína. Os resultados aqui apresentados forneceram informações importantes e novas perspectivas a respeito do mecanismo de catalise da enzima selenofosfato sintetase na via de síntese de selenocisteína
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2014
- Data da defesa: 24.04.2014
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ABNT
FAIM, Lívia Maria. Estudos estruturais e funcionais da Selenofosfato Sintetase de Trypanosoma brucei e Leishmania major. 2014. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-31072014-165101/. Acesso em: 29 maio 2024. -
APA
Faim, L. M. (2014). Estudos estruturais e funcionais da Selenofosfato Sintetase de Trypanosoma brucei e Leishmania major (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-31072014-165101/ -
NLM
Faim LM. Estudos estruturais e funcionais da Selenofosfato Sintetase de Trypanosoma brucei e Leishmania major [Internet]. 2014 ;[citado 2024 maio 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-31072014-165101/ -
Vancouver
Faim LM. Estudos estruturais e funcionais da Selenofosfato Sintetase de Trypanosoma brucei e Leishmania major [Internet]. 2014 ;[citado 2024 maio 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-31072014-165101/
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