Avaliação da expressão gênica em células de mamíferos utilizando o Semliki Forest vírus (2014)
- Authors:
- Autor USP: REZENDE, ALEXANDRE GONçALVES DE - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- Subjects: EXPRESSÃO GÊNICA; PROTEINAS RECOMBINANTES; GLICOPROTEINAS; VIRUS DA RAIVA; CULTURA DE CÉLULAS
- Keywords: Semliki Forest Vírus (SFV); Semliki Forest Vírus (SFV); Cultura de células de mamíferos; Culture of mammalian cells; Expressão de proteínas recombinantes; Expression of recombinant proteins; Glicoproteína do vírus rábico (RVGP); Rabies virus glycoprotein (RVGP)
- Language: Português
- Abstract: O sistema de expressão gênica derivado do Semliki Forest Virus (SFV) vem sendo muito utilizado nos últimos tempos para expressão em grandes quantidades de inúmeras proteínas, quando comparado com outros sistemas. O objetivo desse estudo foi otimizar a capacidade desse vetor viral de expressar proteínas em diferentes linhagens celulares de mamíferos, utilizando como alvo, a glicoproteína do vírus rábico (RVGP). Foram avaliadas formas de obtenção do vetor SFV recombinante, através de diferentes métodos de transfecção, como eletroporação e lipofecção, utilizando um lipossomo comercial chamado Transmessenger (Qiagen, Valencia, CA., U.S.A.). Foi estabelecido, um método rápido e preciso de quantificação das partículas virais, através da técnica de qPCR, para padronizar a relação entre a quantidade de vírus recombinante a ser utilizada em um processo de infecção, visando aumentar os níveis de produção da proteína heteróloga. Diferentes proporções entre vírus e células foram utilizadas em cinco linhagens distintas: BHK-21, Huh-7, VERO, L929 e HEK-293T; sendo avaliados dois tempos de coleta da RVGP após a infecção (24 e 48 h). A proteína gerada foi avaliada através de diferentes métodos como Western Blot, Dot blot e imunofluorescência indireta (IFI), sendo a quantificação da proteína realizada através de ensaio imunoenzimático (ELISA). Esse trabalho contribui para o desenvolvimento de abordagens que utilizam o SFV como vetor de expressão, indicando as melhores metodologias e linhagens celulares, que podem ser utilizadas para aplicação na produção das mais variadas proteínas.
- Imprenta:
- Data da defesa: 16.04.2014
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ABNT
REZENDE, Alexandre Gonçalves de. Avaliação da expressão gênica em células de mamíferos utilizando o Semliki Forest vírus. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-05122014-134720/. Acesso em: 01 jun. 2024. -
APA
Rezende, A. G. de. (2014). Avaliação da expressão gênica em células de mamíferos utilizando o Semliki Forest vírus (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-05122014-134720/ -
NLM
Rezende AG de. Avaliação da expressão gênica em células de mamíferos utilizando o Semliki Forest vírus [Internet]. 2014 ;[citado 2024 jun. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-05122014-134720/ -
Vancouver
Rezende AG de. Avaliação da expressão gênica em células de mamíferos utilizando o Semliki Forest vírus [Internet]. 2014 ;[citado 2024 jun. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-05122014-134720/ - Obtenção de virus like particles (VLPs) de Mayaro usando diferentes sistemas de expressão
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