Tese

Interação de proteínas de micronema de Toxoplasma gondii com N-glicanas de TLR2 (2014)

• Authors:
  • Mendonça, Flávia Costa
  • Roque-Barreira, Maria Cristina (Orientador)
• Autor USP: NATIVIDADE, FLÁVIA COSTA MENDONÇA - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RBP
• Subjects: TOXOPLASMA GONDII; PROTEÍNAS (INTERAÇÃO); RECEPTORES IMUNOLÓGICOS; IMUNIDADE
• Language: Português
• Abstract: A toxoplasmose é causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, parasito intracelular capaz de infectar qualquer célula nucleada de animais homeotermos. Na região apical desse parasito encontram-se várias organelas que liberam moléculas envolvidas no processo de adesão e invasão da célula hospedeira. Dentre esses produtos de secreção incluem-se os liberados por micronemas. Proteínas de micronemas associam-se entre si na superfície do taquizoíta e formam complexos, como TgMIC1/MIC4/MIC6. Os componentes TgMIC1 e TgMIC4 possuem domínios adesivos e são essenciais para a virulência do parasito. Em estudos anteriores, nosso grupo isolou o subcomplexo TgMIC1/MIC4, através de afinidade à lactose imobilizada, e demonstrou sua propriedade de estimular macrófagos murinos a secretar IL-12. A disponibilidade de formas recombinantes de TgMIC1 e TgMIC4 permitiu verificar cada uma das proteínas promovem a liberação de citocinas pró-inflamatórias, moduladoras da imunidade contra o parasito. Constatou-se ainda que macrófagos provenientes de camundongos ‘TLR2 POT. -/-’ ou ‘TLR4 POT. -/-’ produzem menores concentrações de TNF-α, IL-6 e IL-12p40 e IL-1ß em resposta ao estimulo com rTgMIC1 e rTgMIC4. O objetivo desse trabalho foi confirmar o envolvimento das proteínas de micronema com TLR2 e detalhar o estudo da interação dessas proteínas com as N-glicanas ligadas ao receptor. Os resultados obtidos permitem-nos afirmar que as formas recombinantes de TgMIC1 e TgMIC4 (rTgMIC1 e rTgMIC4) interagem com os complexos heterodiméricos TLR2/1 e TLR2/6 expressos em células HEK293T culminando em ativação celular, indicada pela produção de IL-8 que foi verificada por ELISA. Investigamos ainda, se a natureza lectínica de TgMIC1 e TgMIC4 estabelece interações com as N-glicanas ligadas a TLR2 e que, dessa maneira fosse desencadeado ativação gênica manifesta pela produção de IL-8. Nesse contexto, célulasHEK293T foram transfectadas com plasmídeos contendo as sequências para o ectodomínio de TLR2 selvagem e também para os ectodomínios derivados de mutações gênicas, de forma a expressar o receptor destituído de um ou mais sítios de N-glicosilação. Verificamos que a produção de IL-8 foi significantemente comprometida em resposta ao estimulo por rTgMIC1 e rTgMIC4 quando as células foram transfectadas com os diferentes mutantes. A utilização de mutantes para os sítios de N-glicosilação do receptor levou à demonstração de que rTgMIC1 reconhece as N-glicanas de TLR2 com destaque para aquelas presentes no segundo, terceiro e quarto sitio de glicosilação do receptor, enquanto que rTgMIC4 reconhece a quarta glicana de TLR2. Observamos total comprometimento da produção de IL-8 em células transfectadas com o mutante deficiente para o primeiro e quarto sitias de N-glicosilação (E7) e o mutante livre de sitias de N-glicosilação (E6). Utilizando a técnica de Espectroscopia de Impedância Eletroquímica, demonstramos que a ausência das N-glicanas de E7 não impede que o receptor seja direcionado para a superfície, ao contrário de E6, que não é capaz de ser secretado para a superfície de células transfectadas. Dessa forma, confirmamos que as N-glicanas ligadas a TLR2 são importantes para a expressão do receptor na membrana plasmática de células HEK293T transfectadas. Este trabalho demonstra inequivocamente a ocorrência de interação de TgMIC1 e TgMIC4 com N-glicanas de TLR2 e contribui para melhor compreensão do papel exercido por proteínas de micronemas de T.gondii sobre células do hospedeiro, como descrito por nosso grupo
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2014
• Data da defesa: 12.09.2014

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• ABNT

  MENDONÇA, Flávia Costa. Interação de proteínas de micronema de Toxoplasma gondii com N-glicanas de TLR2. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. . Acesso em: 21 maio 2024.

• APA

  Mendonça, F. C. (2014). Interação de proteínas de micronema de Toxoplasma gondii com N-glicanas de TLR2 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Mendonça FC. Interação de proteínas de micronema de Toxoplasma gondii com N-glicanas de TLR2. 2014 ;[citado 2024 maio 21 ]

• Vancouver

  Mendonça FC. Interação de proteínas de micronema de Toxoplasma gondii com N-glicanas de TLR2. 2014 ;[citado 2024 maio 21 ]

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