Uso da cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial para determinação do perfil de eicosanoides em plasma após estimulação: comparação entre pacientes com anemia falciforme e indivíduos saudáveis (2016)
- Authors:
- Autor USP: MEIRELLES, ALYNE FÁVERO GALVÃO - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: EICOSANOIDES; ANEMIA FALCIFORME; TRANSFUSÃO DE SANGUE
- Keywords: Chronic red blood cell (RBC) transfusion; Eicosanoids; Estimulação de sangue total; Hidroxiureia (HU); HPLC-MS/MS; HPLC-MS/MS; Human plasma; Hydroxyurea (HU); Lipidoma; Lipidome; Method validation; Plasma humano; Sickle cell anemia (SCA); Validação de método; Whole blood stimulation
- Language: Português
- Abstract: Os eicosanoides, produtos do metabolismo do ácido araquidônico, apresentam papel importante na homeostasia e na patogênese de diversas doenças humanas. A biossíntese desses compostos pode ser estimulada por agentes farmacológicos como ionóforos e inibidores da Ca2+-ATPase, e também por agonistas naturais como o formil-metionil-leucil-fenialanina (fMLP). Considerando os interesses em avaliar e comparar o perfil de mediadores lipídicos, como os leucotrienos (LTs), as prostaglandinas (PGs), os ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs), os ácidos dihidroxitetraenoicos (DiHETEs) e os ácidos hidroxieicosatetraenoicos (HETEs), na saúde e na doença, o objetivo deste trabalho foi padronizar um método analítico para determinar do perfil de eicosanoides em plasma humano após estimulação do sangue total, e assim observar diferenças entre indivíduos saudáveis e doentes. Dessa forma, um método por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (HPLC-MS/MS) foi validado para quantificação de 22 eicosanoides em plasma de indivíduos saudáveis. A análise por HPLCMS/ MS foi realizada em modo negativo pelo modo de varredura por monitoramento de reações múltiplas (MRM). A linearidade do método apresentou coeficiente de correlação (r) maior que 0,98 para todos os eicosanoides analisados. A precisão e exatidão intra e inter-ensaios tiveram desvio padrão e erro relativo menores que 15%, exceto para o limite inferior de quantificação cujos valores foram menores que20%. Para estimulação das células do sangue total, quatro estímulos (fMLP, ionomicina, A23187 e tapsigargina) foram utilizados. A análise estatística mostrou que o A23187 e a tapsigargina foram os estímulos mais potentes na indução da produção de eicosanoides. Em seguida, comparamos o perfil de eicosanoides em amostras de plasma de indivíduos saudáveis com pacientes com anemia falciforme (AF), em tratamento com hidroxiureia (HU) ou transfusão sanguínea crônica. Os resultados demonstraram que o método é preciso para determinação de diferenças entre os pacientes e indivíduos saudáveis quanto à produção dos mediadores lipídicos 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2 e PGE2. Portanto, nosso método analítico é sensível, específico e reprodutível para identificar e quantificar diferenças no perfil de eicosanoides em amostras de sangue estimuladas in vitro, e poderá contribuir para o estabelecimento do perfil de mediadores lipídicos em diferentes doenças inflamatórias e infecciosas
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 24.03.2016
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ABNT
MEIRELLES, Alyne Fávero Galvão. Uso da cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial para determinação do perfil de eicosanoides em plasma após estimulação: comparação entre pacientes com anemia falciforme e indivíduos saudáveis. 2016. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-02052016-105840/. Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Meirelles, A. F. G. (2016). Uso da cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial para determinação do perfil de eicosanoides em plasma após estimulação: comparação entre pacientes com anemia falciforme e indivíduos saudáveis (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-02052016-105840/ -
NLM
Meirelles AFG. Uso da cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial para determinação do perfil de eicosanoides em plasma após estimulação: comparação entre pacientes com anemia falciforme e indivíduos saudáveis [Internet]. 2016 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-02052016-105840/ -
Vancouver
Meirelles AFG. Uso da cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial para determinação do perfil de eicosanoides em plasma após estimulação: comparação entre pacientes com anemia falciforme e indivíduos saudáveis [Internet]. 2016 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-02052016-105840/ - Papel dos mediadores lipídicos na resistência do melanoma humano ao inibidor de BRAF (Vemurafenibe)
- Prostaglandin E2 induces expression of mineralization genes by undifferentiated dental pulp cells
- Arctium lappa extract suppresses inflammation and inhibits melanoma progression
- CD36 shunts eicosanoid metabolism to repress CD14 licensed interleukin-1β release and inflammation
- Comprehensive high-resolution multiple-reaction monitoring mass spectrometry for targeted eicosanoid assays
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