Estímulo por soro em fibroblastos quiescentes induz a fosforilação da miosina-Va e sua localização em adesões focais (2016)
- Authors:
- Autor USP: ZENZEN, JOHNNY ALEX ROCKENBACH - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: MIOSINA; FIBROBLASTOS; BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
- Keywords: Adesão Focal; FAK; Miosina Va; Quiescência; Focal adhesions; Myosin Va; Quiescence
- Language: Português
- Abstract: A montagem e desmontagem das adesões focais (AF) desempenham um papel fundamental em diversos processos celulares, incluindo mugração celular e sobrevivência. Resultados prévios do nosso laboratório mostram que fibroblastos nulos ou silenciados para miosina-Va sofrem um atraso na desmontagem das adesões, sugerindo um papel para a miosinaVa neste processo. Neste trabalho, visamos analisar a dinâmica de montagem das AF em fibroblastos murinos imortalizados NIH31T3, utilizando sondas fluorescentes para visualização de componentes de adesão focal. A formação das AF foi analisada apos estimulo por soro de células quiescentes, o que leva a intensa polimerização de actina, reorganização do citoesqueleto e montagem das AF. A cinética de montagem das AF foi observada em ensaios ao longo do tempo, de células fixadas em 0, 5, 15, 30, 120 minutos após estímulo, e marcadas para miosina-Va fosforilada (p-miosina-Va, S 1650), FAK fosforilada (p-FAK, Y397), vinculina, dinamina-2, integrina-,B1, faloidina, Ki67 e DAPI. Os nossos resultados mostraram um aumento de fluorescência de p-miosina-Va por todo o citoplasma após a estímulo com soro, e revelaram que a p-miosina-Va co-localiza com pFAK nas AF logo após o estímulo, essa localização da p-miosina-Va nas AF diminui ao passar do tempo e retorna após 120 minutos. Isto é consistente com os resultados anteriores de um papel da miosina-Va na dinamica das AF. Também é possível perceber uma maior concentração de p-miosina-Va e dinamina-2 na região perinuclear, 5 minutos após estímulo, e o espalhamento de ambas as proteínas pelo citoplasma com o passar do tempo. Demonstramos, por Western blotting, que o estímulo por soro não causa alteração na quantidade total de miosina-Va em nenhum dos tempos analisados em relação à condição de quiescência, mas induz, após 5 e 15 minutos, um aumento apreciável de p-miosina-Va,que sofre queda e variações nos tempos posteriores. Para nosso conhecimento, esta é a primeira demonstração de que a fosforilação da miosina-Va aumenta em resposta ao soro e estamos investigando se este evento está ligado à dinâmica das adesões focais em fibroblastos
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 11.03.2016
-
ABNT
ZENZEN, Johnny Alex Rockenbach. Estímulo por soro em fibroblastos quiescentes induz a fosforilação da miosina-Va e sua localização em adesões focais. 2016. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-21072016-151221/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Zenzen, J. A. R. (2016). Estímulo por soro em fibroblastos quiescentes induz a fosforilação da miosina-Va e sua localização em adesões focais (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-21072016-151221/ -
NLM
Zenzen JAR. Estímulo por soro em fibroblastos quiescentes induz a fosforilação da miosina-Va e sua localização em adesões focais [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-21072016-151221/ -
Vancouver
Zenzen JAR. Estímulo por soro em fibroblastos quiescentes induz a fosforilação da miosina-Va e sua localização em adesões focais [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-21072016-151221/
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