Tese

Impacto da criotolerância de oócitos bovinos, em relação a expressão gênica, apoptose e produção embrionária, e o efeito da suplementação com fosfolipídio na maturação in vitro e vitrificação (2016)

• Authors:
  • Molina, Caroline Palmieri Pitangui
  • Silva, Ana Carolina Japur de Sá Rosa e (Orientador)
• Autor USP: MOLINA, CAROLINE PALMIERI PITANGUI - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RGO
• Subjects: EXPRESSÃO GÊNICA; APOPTOSE; FOSFOLIPÍDEOS
• Language: Português
• Abstract: A vitrificação de oócitos pode comprometer em parte a capacidade reprodutiva desta célula, especialmente no modelo bovino. Porém, a composição lipídica dos meios de cultivo parecem interferir na composição de lipídios da membrana plasmática do oócito, podendo ter alguma importância nos resultados das técnicas de vitrificação e maturação in vitro (MIV) na prática clínica, com um potencial impacto destes fosfolipídios na criotolerância dos oócitos. O objetivo deste estudo consistiu em avaliar os efeitos da MIV e da vitrificação, suplementada ou não com fosfolipídio, sobre os resultados reprodutivos de oócitos bovinos vitrificados. Além disso, foi avaliado o efeito da vitrificação sobre a expressão de genes associados ao processo reprodutivo e à vitalidade celular, tais como IDH2 (envolvido na regulação do equilíbrio redox mitocondrial), o ZP3 (codificador da proteína responsável pela ligação inicial do espermatozoide-oócito e na indução da exocitose acromossal) e os genes BAX e BCL2 envolvidos no processo de apoptose, sendo o primeiro pró-apoptótico e o segundo antiapoptótico, e também o efeito da vitrificação em relação a apoptose destas células. Para tanto foram realizados quatro diferentes experimentos: 1. MIV convencional e vitrificação com e sem fosfatidilcolina; 2. MIV com fosfatidilcolina seguido de vitrificação com ou sem fosfatidilcolina, ambos experimentos seguidos de fertilização in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV) de embriões; 3. análise dos níveis de transcritos gênicos pela técnica de real time PCR, e 4. apoptose (pela técnica de TUNEL), ambos em oócitos frescos e vitrificados. Verificou-se uma baixa produção embrionária nos grupos vitrificados quando comparada ao grupo fresco, sendo que acréscimo de fosfolipídio exclusivamente nos meios de vitrificação não interferiu na produção in vitro ii de embriões, avaliada pelas taxas de clivagem (fresco= 73,35%,vitrificado= 3,8% e vitrificado+PL=2,2%; p=0.01) e formação de blastocisto (fresco= 42,03%, vitrificado= 0,0% e Vitrificado+PL=0,0%; p=0.01). Tampouco o acréscimo de fosfolipídio nos meios de MIV, independente da suplementação do meio vitrificado, produziu efeitos positivos sobre o desenvolvimento embrionário (taxas de clivagem dos grupos fresco= 72,82%, vitrificado= 1,16% e vitrificado+PL=6,45%; p=0.01; e taxa de formação de blastocisto dos grupos fresco= 42,64%, vitrificado= 0,0% e vitrificado+PL=1,08%; p=0.01). Em relação aos níveis de transcritos dos genes ZP3 e IDH2 não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos. Entretanto nos transcritos dos genes BAX (p=0,04) e BCL2 (p=0,01) verificou-se uma redução dos mesmos nos oócitos vitrificados quando comparados aos frescos. Complementando este achado, foi analisado a apoptose de oócitos maturados in vitro frescos e vitrificados, utilizando-se da técnica de TUNEL, observou-se maior fragmentação de DNA no grupo vitrificado (p=0,01). Com isso, podemos concluir que a técnica de vitrificação utilizada neste trabalho comprometeu a função do oócito, interferindo nas taxas de produção embrionária, nos níveis de transcritos de genes relacionados a apoptose, bem como aumentou a fragmentação do DNA. Concluímos também que o acréscimo de fosfolipídio ao meio de maturação e/ou de vitrificação oocitária, nas condições experimentais não é eficiente para reduzir os danos causados pela criopreservação
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2016
• Data da defesa: 27.07.2016

---

How to cite

A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

• ABNT

  MOLINA, Caroline Palmieri Pitangui. Impacto da criotolerância de oócitos bovinos, em relação a expressão gênica, apoptose e produção embrionária, e o efeito da suplementação com fosfolipídio na maturação in vitro e vitrificação. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. . Acesso em: 10 jun. 2024.

• APA

  Molina, C. P. P. (2016). Impacto da criotolerância de oócitos bovinos, em relação a expressão gênica, apoptose e produção embrionária, e o efeito da suplementação com fosfolipídio na maturação in vitro e vitrificação (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Molina CPP. Impacto da criotolerância de oócitos bovinos, em relação a expressão gênica, apoptose e produção embrionária, e o efeito da suplementação com fosfolipídio na maturação in vitro e vitrificação. 2016 ;[citado 2024 jun. 10 ]

• Vancouver

  Molina CPP. Impacto da criotolerância de oócitos bovinos, em relação a expressão gênica, apoptose e produção embrionária, e o efeito da suplementação com fosfolipídio na maturação in vitro e vitrificação. 2016 ;[citado 2024 jun. 10 ]

Últimas obras dos mesmos autores vinculados com a USP cadastradas na BDPI:

• Determinação do perfil lipídico por espectrometria de massas de oócitos bovinos maturados em meio suplementados com fosfolipídio: uma nova estratégia para modular a criotolerância oocitária