Tese

O papel do BMI1 nas vias de sinalização da recombinação homóloga do DNA no cancer de mama (2016)

• Authors:
  • Silveira, Giórgia Gobbi da
  • Ribeiro-Silva, Alfredo (Orientador)
• Autor USP: SILVEIRA, GIÓRGIA GOBBI DA - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RPA
• Subjects: CARCINOMA DE DUCTOS INFILTRANTE; PROTEÍNAS; RECOMBINAÇÃO GENÉTICA
• Language: Português
• Abstract: A recombinação homóloga (RH) é uma via de reparo de danos à dupla-fita de DNA. O BRCA1 e BRCA2, associados à proteína RAD51, acumulam-se nos focos de dano ao DNA após a sinalização do H2AX, que é fosforilado na forma yH2AX e se acumula rapidamente nos focos de lesão, associado à via ATM/ATR, desencadeando o processo de reparo. O BMI1 é uma proteína do grupo Polycomb capaz de induzir atividade de telomerase, levando à imortalização de células epiteliais, tornando-as mais susceptiveis a danos em dupla fita. O impacto do BMI1 nas proteínas envolvidas na recombinação necessita ser melhor investigado. Desta maneira, nosso objetivo foi avaliar a relação entre BMI1 e genes reguladores da RH. Para isto, realizamos o cultivo de células MCF-7, que expressam constitutivamente o BMI1. A partir desta cultura, estabelecemos dois grupos, o BMI1 positivo e o BMI1 silenciado via Lipofectamina + siRNA. Para as análises de expressão gênica e proteica e imunolocalização utilizamos, respectivamente, ensaios de qRT-PCR, Western Blot e imunofluorescência indireta, a fim de analisar a expressão de genes e proteínas associadas à RH (BRCA1 e 2, ATM, ATR, RAD51 e H2AX) na presença e ausência de BMI1. Para caracterização funcional de células BMI1 positivas e negativas, realizamos ensaios de apoptose por TUNEL, migração por wound-healing e ensaios de proliferação celular. Nossos resultados demonstram uma significativa redução da expressão gênica dos marcadores ATM (p<0.0001), ATR (p<0.0001), BRCA1 (p=0.001), BRCA2 (ps0.0001), H2AX(p=0.001) e RAD51 (p<0.0001) nas amostras tratadas com siRNA. Observamos também redução na expressão proteica de ATR (p=0.004), BRCA1 (p=0.019), mas não de ATM (p=0,085) e RAD51 (p=0.900), e um aumento da expressão de H2AX (p=0.015) nas amostras tratadas. Na imunolocalização, observamos redução na expressão nuclear dos marcadores ATM, ATR,BRCA1, BRCA2 e RAD51 e um aumento na expressão nuclear de yH2AX. As amostras tratadas proliferam significativamente menos e apresentaram um maior número de células apoptóticas que as amostras controle. Nossos resultados demonstram que o BMI1 é fundamental para o carreto funcionamento da recombinação homóloga do DNA, e emerge como um potencial alvo para o tratamento do cancer
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2016
• Data da defesa: 04.03.2016

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How to cite

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• ABNT

  SILVEIRA, Giórgia Gobbi da. O papel do BMI1 nas vias de sinalização da recombinação homóloga do DNA no cancer de mama. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. . Acesso em: 21 maio 2024.

• APA

  Silveira, G. G. da. (2016). O papel do BMI1 nas vias de sinalização da recombinação homóloga do DNA no cancer de mama (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Silveira GG da. O papel do BMI1 nas vias de sinalização da recombinação homóloga do DNA no cancer de mama. 2016 ;[citado 2024 maio 21 ]

• Vancouver

  Silveira GG da. O papel do BMI1 nas vias de sinalização da recombinação homóloga do DNA no cancer de mama. 2016 ;[citado 2024 maio 21 ]

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