Acoplamento das técnicas HPLC-ICP OES para separação e identificação de metaloproteínas em castanhas de caju (2016)
- Authors:
- Autor USP: SIQUEIRA, BRUNO MENEZES - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: METALOPROTEINASES; CASTANHA; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: O objetivo desse trabalho foi demonstrar a viabilidade do acoplamento entre as técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência com a espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (HPLC - ICP OES) em um equipamento da Thermo Fisher Scientific, visando análise de especiação elementar de espécies com maiores concentrações na amostra. A identificação de espécies moleculares associadas aos elementos Cu, Fe, Mg, e Zn em amostras de castanha de caju foi adotada como modelo para comprovar tal acoplamento. Para que o ICP OES pudesse adquirir sinais de emissão ao longo de um tempo determinado, ou seja, para que o equipamento pudesse coletar um sinal transiente, fundamental para o acoplamento HPLC - ICP OES, foi necessário executar algumas modificações. Para isso, foram feitas alterações na placa eletrônica principal do equipamento, e trocada sua caixa controladora de gases. Os parâmetros instrumentais do ICP OES foram otimizados em uma série de ensaios com o intuito de estabelecer e avaliar desempenho do instrumento e a robustez do método empregado nas análises de castanha de caju. Determinações das concentrações totais de Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, Ni, e Zn foram feitas em amostras de castanha de caju e nos materiais de referência NIST 1515 e NIST 1547, apresentando uma exatidão do método aceitável, levando-se em consideração o preparo de amostra e a medida no ICP OES. As determinações totais elementares nas amostras de castanha de caju indicaram que os teores de Ca foram de (0,04 ± 0,01) % ; Cu (26,3 ± 5,0) mg ‘kgPOT.-1’; Fe (47,9 ± 8,8) mg ‘kgPOT.-1’; Mg (0,31 ± 0,04) %; Mn (25,6 ± 3,9) mg ‘kgPOT.-1’; Ni (24,8 ± 1,9) mg ‘kgPOT.-1’; Zn (66,3 ± 2,4) mg ‘kgPOT.-1’. Para identificação de espécies moleculares associadas aos elementos Cu, Fe, Mg, e Zn, foi feita nas amostras de castanha de caju uma extração de metais e proteínasutilizando-se de uma solução extrato de NaOH 1 mol ‘LPOT.-1’. O extrato ainda foi submetido à uma etapa de clean-up, com precipitação das proteínas com acetona e ressupenção das mesmas com tampão Tris-HCl, pH 7,4. As proteínas e metais ressupensos em tampão foram analisados no sistema HPLC ICP OES, em que a separação cromatográfica ocorreu através de uma coluna de exclusão por tamanho (SEC), a detecção molecular através do detector UV-Vis do HPLC, e a detecção elementar através do ICP OES. As espécies moleculares identificadas estão no intervalo de massa molecular compreendido entre 2 e 177 kDa, sendo que Cu, Fe e Zn apresentam associação com essas espécies moleculares. Foram monitorados ainda, no ICP OES, os sinais de intensidade de emissão de P e S. Esses elementos também apresentaram associação com espécies moleculares com peso molecular entre 2 e 177 kDa, sugerindo que essas espécies se tratam de metaloproteínas
- Imprenta:
- Data da defesa: 02.09.2016
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ABNT
SIQUEIRA, Bruno Menezes. Acoplamento das técnicas HPLC-ICP OES para separação e identificação de metaloproteínas em castanhas de caju. 2016. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46137/tde-21062017-143454/. Acesso em: 30 maio 2024. -
APA
Siqueira, B. M. (2016). Acoplamento das técnicas HPLC-ICP OES para separação e identificação de metaloproteínas em castanhas de caju (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46137/tde-21062017-143454/ -
NLM
Siqueira BM. Acoplamento das técnicas HPLC-ICP OES para separação e identificação de metaloproteínas em castanhas de caju [Internet]. 2016 ;[citado 2024 maio 30 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46137/tde-21062017-143454/ -
Vancouver
Siqueira BM. Acoplamento das técnicas HPLC-ICP OES para separação e identificação de metaloproteínas em castanhas de caju [Internet]. 2016 ;[citado 2024 maio 30 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46137/tde-21062017-143454/
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