Cultura de células embrionárias de carrapatos do gênero Rhipicephalus para cultivo de Ehrlichia canis e Anaplasma marginale (2017)
- Authors:
- Autor USP: DUARTE, LEIDIANE LIMA - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- Subjects: RHIPICEPHALUS SANGUINEUS; CULTURA DE CÉLULAS; EHRLICHIA; CARRAPATOS
- Keywords: <i>Anaplasma marginale</i>; <i>Anaplasma marginale</i>; <i>Ehrlichia canis</i>; <i>Ehrlichia canis</i>; <i>Rhipicephalus (Boophilus) microplus</i>; <i>Rhipicephalus (Boophilus) microplus</i>; <i>Rhipicephalus sanguineus</i> s.l; Culturas de células embrionárias; Embryonic cell culture
- Language: Português
- Abstract: No Brasil, carrapatos do gênero Rhipicephalus são representados pelas espécies Rhipicephalus sanguineuss.l. (Latreille) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini), sendo que a primeira espécie possui especificidade com cães domésticos e a segunda com bovinos. Para o cão, R. sanguineus s.l. é o principal vetor de agentes causadores da babesiose canina e da erliquiose, enquanto que nos bovinos, R. microplus é responsável, principalmente, pela transmissão de agentes causadores da babesiose e anaplasmose. Alguns dos patógenos causadores dessas doenças são difíceis de serem cultivados in vitro, e não crescem em meios artificiais, especialmente Anaplasma spp. Assim, muitas linhagens celulares de carrapatos foram desenvolvidas nos últimos 40 anos e têm sido amplamente utilizadas para isolamento e propagação de microrganismos patogênicos. Cultivos celulares obtidos de células embrionárias de carrapatos oferecem um sistema de vetor in vitro, que é útil principalmente para estudos de agentes intracelulares. Dessa forma, a obtenção de culturas de células embrionárias de R. sanguineus (origens tropical e temperada) e de R. (B.) microplus, bem como, sua infecção com Ehrlichia canis e Anaplasma marginale, respectivamente, são objetivos do presente estudo. Os cultivos celulares dessas espécies de carrapatos foram preparados com massas de ovos de diferentes idades e mantidos à 30 °C em meio de cultura L15-B, suplementado com 10% de Triptose Fosfato e 20% de Soro Fetal Bovino.Subcultivos foram realizados após a formação da monocamada celular confluente. As identidades celulares foram confirmadas pela PCR e sequenciamento, utilizando um fragmento do gene mitocondrial 16S rDNA. As sequências das culturas de células de R. sanguineus (tropical e temperada) e de R. microplus foram depositadas no GenBank. Essas culturas de células foram infectadas com E. canis e A. marginale (cepas Jaboticabal), respectivamente, e mantidas em meio L-15B (Vitrocell) suplementado com Soro Fetal Bovino enriquecido com ferro (Hyclone) nas concentrações de 2% e 5%. As células infectadas foram mantidas em propagações sucessivas até a terceira passagem, para novas culturas de células não infectadas, sendo então criopreservadas. O DNA extraído das células infectadas e não infectadas de R. sanguineus (de ambas as origens) e de R. microplus, foi analisado pela PCR quantitativa em tempo real (qPCR), utilizando os genes E. canis-dsb e msp1β, respectivamente. Propagações de células de carrapatos infectadas para as novas culturas de R. sanguineus (origem tropical) e R. (B) microplus, foram bem sucedidas. Por outro lado, as células de R. sanguineus (origem temperada) não se tornaram infectadas no presente estudo
- Imprenta:
- Data da defesa: 15.08.2017
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ABNT
DUARTE, Leidiane Lima. Cultura de células embrionárias de carrapatos do gênero Rhipicephalus para cultivo de Ehrlichia canis e Anaplasma marginale. 2017. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2017. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-20022018-162038/. Acesso em: 12 jun. 2024. -
APA
Duarte, L. L. (2017). Cultura de células embrionárias de carrapatos do gênero Rhipicephalus para cultivo de Ehrlichia canis e Anaplasma marginale (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-20022018-162038/ -
NLM
Duarte LL. Cultura de células embrionárias de carrapatos do gênero Rhipicephalus para cultivo de Ehrlichia canis e Anaplasma marginale [Internet]. 2017 ;[citado 2024 jun. 12 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-20022018-162038/ -
Vancouver
Duarte LL. Cultura de células embrionárias de carrapatos do gênero Rhipicephalus para cultivo de Ehrlichia canis e Anaplasma marginale [Internet]. 2017 ;[citado 2024 jun. 12 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-20022018-162038/ - Establishment and characterization of embryonic cell lines of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (RBME-6) and Amblyomma sculptum (ASE-14) (Acari:Ixodida) from Brazil
- Establishment and multiapproach characterization of Amblyomma sculptum (Acari: Ixodidae) cell line (ASE-14) from Brazil
- Establishment and characterization of a cell line (RBME-6) of Rhipicephalus (Boophilus) microplus from Brazil
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