A deficiência das proteínas de checkpoint HUS1 e RAD9 promove a variação do número de cópias no genoma de Leishmania major (2017)
- Authors:
- Autor USP: GOMEZ, RICARDO OBONAGA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: LEISHMANIA; TRIPANOSSOMOSE; GENOMAS; DNA; AMPLIFICAÇÃO DO DNA
- Keywords: 9-1-1 complex; Amplificação gênica; Aneuplodia; Aneuploidy; Complexo 9-1-1; Copy number variation; DHFR-TS; Gene amplification; Genomic instability; Genomic plasticity; HUS1; Instabilidade genômica; Leishmania; Plasticidade genômica; RAD1; RAD9; ssDNA; Tripanosomatídeos; Trypanosomatids; Variação do número de cópias; yH2A
- Language: Português
- Abstract: A variação do número de cópias (CNV) de genes e cromossomos é uma característica comum do genoma plástico de Leishmania major, que pode estar associada à resistência do parasita à quimioterapia das leishmanioses. Em outros eucariotos, alterações na replicação do DNA ou na resposta a danos no DNA (DDR) pode levar à CNV. Nestes organismos, o complexo de checkpoint 9-1-1 (RAD9, RAD1 e HUS1) é essencial para a detecção e a sinalização do estresse de replicação e para o recrutamento de uma apropriada DDR. Já demonstramos que L. major expressa um homólogo 9-1-1 funcional. Aqui, avaliamos a deficiência de subunidades de 9-1-1 na variação do número de cópias em células selecionadas em metotrexato (MTX), um inibidor da enzima diidrofolato redutase timidilato sintetase (DHFR-TS). A seleção em MTX facilita o isolamento de células que carregam amplificações contendo o locus da DHFR-TS. Assim, selecionamos células deficientes de HUS1 ou RAD9 para resistência ao MTX sem e com exposição previa a hidroxiureia (HU), uma droga que causa estresse de replicação por inibição da ribonucleotideo redutase, e avaliamos o efeito da deficiência destas proteínas na CNV e no tipo de amplificação gerada. Avaliamos também o efeito da deficiência destas proteínas no processo de síntese do DNA medido pela incorporação de IdU e observamos que a deficiência destas proteínas levou a um incremento na síntese do DNA na ausência de estresse de replicação e a perfis apostos de síntese do DNA após a remoção do estresse replicativo. Análises da detecção de simples fita do DNA (ssDNA) e da histona H2A fosforilada (yH2A) como indicadores do processo de estresse de replicação e dano no DNA também foram conduzidas. Em conjunto, nossos resultados indicam que (i) os níveis alterados das proteínas HUS1 e RAD9 afetam o padrão da CNV após a seleção no MTX, assim como a natureza daamplificação; (ii) HUS1 e RAD9 parecem possuir mecanismos distintos para mediar a CNV; (iii) a função destas proteínas na CNV deve envolver o processo de replicação e (iv) HUS1 e RAD9 são requeridas para a manutenção da estabilidade genômica em Leishmania. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão não só da evolução da via de sinalização mediada pelo complexo de checkpoint 9-1-1 nos eucariotos, mas também da bases moleculares da plasticidade genômica e do fenômeno de amplificação gênica em Leishmania
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2017
- Data da defesa: 18.12.2017
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ABNT
GÓMEZ, Ricardo Obonaga. A deficiência das proteínas de checkpoint HUS1 e RAD9 promove a variação do número de cópias no genoma de Leishmania major. 2017. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2017. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-25042018-163036/. Acesso em: 01 jun. 2024. -
APA
Gómez, R. O. (2017). A deficiência das proteínas de checkpoint HUS1 e RAD9 promove a variação do número de cópias no genoma de Leishmania major (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-25042018-163036/ -
NLM
Gómez RO. A deficiência das proteínas de checkpoint HUS1 e RAD9 promove a variação do número de cópias no genoma de Leishmania major [Internet]. 2017 ;[citado 2024 jun. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-25042018-163036/ -
Vancouver
Gómez RO. A deficiência das proteínas de checkpoint HUS1 e RAD9 promove a variação do número de cópias no genoma de Leishmania major [Internet]. 2017 ;[citado 2024 jun. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-25042018-163036/
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