Expressão heteróloga de um transportador mitocondrial de nicotinamida adenina dinucleotídeo (Ndt1) de Aspergillus fumigatus em células HEK293 com deficiência da citrina (2018)
- Authors:
- Autor USP: BALICO, LAÍS DE LOURDES DE LIMA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: BIOCIÊNCIAS; FARMÁCIA; MITOCÔNDRIAS; ASPERGILLUS
- Keywords: Aspergillus fumigatus; Citrina; Citrulinemia; Transportador mitocondrial de nicotinamida adenina dinucleotídeo; Citrin; Citrullinemia; Mitochondria; Mitochondrial nicotinamide adenine dinucleotide transporter
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O balanço redox em mitocôndrias de mamíferos é realizado pelo transportador de aspartato-glutamato (AGC), o qual é o principal mecanismo para o movimento de equivalentes redutores na forma de NADH. A citrulinemia do tipo II (CTLN2) é uma doença autossômica recessiva de início tardio, causada por mutações no gene SLC25A13 que codifica a citrina. A citrina é uma isoforma do transportador AGC e catalisa o transporte de glutamato citosólico através da troca com o aspartato mitocondrial, o qual será utilizado no ciclo da ureia. A CTLN2 promove uma deficiência no ciclo da ureia e consequente hiperamonemia. A deficiência da citrina promove um aumento da razão NADH/NAD+ citosólica. O aumento dessa razão inibe a glicólise e a gliconeogênese. O desenvolvimento de modelo in vitro da CTLN2 é importante para estudos do mecanismo da doença e de novas terapias. A expressão heteróloga de proteínas entre diferentes reinos tem sido utilizado como uma forma de corrigir algumas doenças mitocondriais. Estudos bioquímicos e moleculares em nosso laboratório demonstraram a presença de um transportador mitocondrial de nicotinamida adenina dinucleotídeo (Ndt1) em Aspergillus fumigatus. Ndt1 realiza o transporte de NAD+ citosólico para a matriz mitocondrial, sendo dessa forma uma proteína importante para manter o balanço redox em A. fumigatus. Assim, o objetivo deste trabalho foi obter uma linhagem de células de mamífero HEK293 com knockdown para o gene SLC25A13, ou seja, um modelo in vitro de CTLN2 e a expressão heteróloga da proteína Ndt1 como uma forma de recuperação do metabolismo. As células com knockdown para o gene SLC25A13 apresentaram um aumento da razão NADH/NAD+ citosólico, redução da glicólise, redução da concentração da ureia e aumento da concentração de amônia. A expressão de Ndt1 foi capaz de reduzir a razão NADH/NAD+ citosólico e recuperou aatividade glicolitica. Entretanto, a expressão de Ndt1 não foi capaz de aumentar a concentração de ureia e reduzir a concentração de amônia causadas pela CTLN2. Dessa forma, nossos resultados sugerem que a expressão da proteína Ndt1 em células de mamíferos recupera o metabolismo mitocondrial e atividade glicolítica das células com CTLN2, mas não melhora o ciclo da ureia e o aumento da concentração de amônia
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2018
- Data da defesa: 21.11.2018
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ABNT
BALICO, Laís de Lourdes de Lima. Expressão heteróloga de um transportador mitocondrial de nicotinamida adenina dinucleotídeo (Ndt1) de Aspergillus fumigatus em células HEK293 com deficiência da citrina. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052019-073717/. Acesso em: 29 maio 2024. -
APA
Balico, L. de L. de L. (2018). Expressão heteróloga de um transportador mitocondrial de nicotinamida adenina dinucleotídeo (Ndt1) de Aspergillus fumigatus em células HEK293 com deficiência da citrina (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052019-073717/ -
NLM
Balico L de L de L. Expressão heteróloga de um transportador mitocondrial de nicotinamida adenina dinucleotídeo (Ndt1) de Aspergillus fumigatus em células HEK293 com deficiência da citrina [Internet]. 2018 ;[citado 2024 maio 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052019-073717/ -
Vancouver
Balico L de L de L. Expressão heteróloga de um transportador mitocondrial de nicotinamida adenina dinucleotídeo (Ndt1) de Aspergillus fumigatus em células HEK293 com deficiência da citrina [Internet]. 2018 ;[citado 2024 maio 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052019-073717/
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