Secreção de Gaussia luciferase como indicador de atividade de caspase-3/7 em resposta ao tratamento com AdCDKN2A IRES p53 em glioblastoma multiforme (2018)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, DANIEL VIEIRA CONDE - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMC
- Subjects: GENES SUPRESSORES DE TUMOR; ASTROCITOMA; ADENOVÍRUS; ENZIMAS PROTEOLÍTICAS; CATALASE; AMINOÁCIDOS; ATIVAÇÃO ENZIMÁTICA
- Keywords: Adenovirus; Adenovírus; Cancer; Câncer; Gene therapy; Genes supressores de tumor; Luciferase; Luciferase; Terapia gênica; Tumor suppressor genes
- Language: Português
- Abstract: Este trabalho descreve a remediação simultânea de dois genes supressores de tumor, CDKN2A e p53, em três linhagens celulares derivadas de glioblastoma multiforme: U87 (CDKN2A-/-, p53wt/wt), U251 (CDKN2A-/-, p53mut/mut) e T98G (CDKN2A-/-, p53mut/mut). A entrega gênica foi mediada por vetor adenoviral bicistrônico contendo o cassete CDKN2AIRESp53, capaz de expressar as duas proteínas simultaneamente. Vetores monocistrônicos também foram testados (AdCDKN2A e Adp53). Visando detectar apoptose, as linhagens receberam o sensor de atividade de caspase-3/7 GFP-DEVD-ssGLUC por transdução lentiviral. Este possui Gaussia luciferase (GLUC) C-terminal, que é secretada após ativação de caspases e pode ser dosada no sobrenadante. Após a marcação, realizaram-se ensaios de viabilidade celular, proliferação, formação de colônias, senescência, ciclo celular e dosagem de GLUC após remediação dos genes supressores de tumor nas linhagens GBMDEVD-GLUC. Com ensaio de viabilidade, observou-se efeito citotóxico do vetor bicistrônico AdCDKN2AIRESp53 maior que a soma dos obtidos com cada tratamento monocistrônico. No ensaio de senescência, o vetor AdCDKN2A resultou na maior indução do fenótipo senescente em todas as linhagens, seguido por Adp53, enquanto AdCDKN2AIRESp53 produziu resultados similares a um desses dois perfis em cada linhagem. Dosagem de GLUC no sobrenadante foi usada como indicador para atividade de caspase-3/7 após tratamento com os vetores supressores de tumor. O controle AdLacZresultou em atividade de GLUC maior que nas amostras sem vírus (mock), enquanto tratamento com AdCDKN2A obteve resultados maiores que o controle em 72 h nas três linhagens. O vetor AdCDKN2AIRESp53 alcançou, inesperadamente, resultados variados em 72 h. Os dados obtidos neste trabalho indicam que a remediação simultânea de CDKN2A e p53 possui notável ação antiproliferativa tumoral, podendo levar à morte ou à senescência celular. Também é apontado que o sensor de caspase-3/7 GFP-DEVD-ssGLUC é robusto, mas detecta não apenas a indução de apoptose, mas a combinação de todos os processos ativadores de caspases em uma amostra
- Imprenta:
- Data da defesa: 05.11.2018
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ABNT
OLIVEIRA, Daniel Vieira Conde. Secreção de Gaussia luciferase como indicador de atividade de caspase-3/7 em resposta ao tratamento com AdCDKN2A IRES p53 em glioblastoma multiforme. 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-18022019-101454/. Acesso em: 01 maio 2024. -
APA
Oliveira, D. V. C. (2018). Secreção de Gaussia luciferase como indicador de atividade de caspase-3/7 em resposta ao tratamento com AdCDKN2A IRES p53 em glioblastoma multiforme (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-18022019-101454/ -
NLM
Oliveira DVC. Secreção de Gaussia luciferase como indicador de atividade de caspase-3/7 em resposta ao tratamento com AdCDKN2A IRES p53 em glioblastoma multiforme [Internet]. 2018 ;[citado 2024 maio 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-18022019-101454/ -
Vancouver
Oliveira DVC. Secreção de Gaussia luciferase como indicador de atividade de caspase-3/7 em resposta ao tratamento com AdCDKN2A IRES p53 em glioblastoma multiforme [Internet]. 2018 ;[citado 2024 maio 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-18022019-101454/
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