Estudo da ativação de inflamassoma por toxinas isoladas de venenos botrópicos e modulação da resposta imune (2018)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, PRISCILA DE ANDRADE RANÉIA E - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMI
- Subjects: TOXINAS EM ANIMAL; VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; MACRÓFAGOS; INFLAMAÇÃO; CITOCINAS; CAMUNDONGOS
- Keywords: Bothrops envenomation; jararhagin; bothropstoxin-I; bothropstoxina-I; IL-1; MCP-1; célula muscular; envenenamento botrópico; IL-1β; inflamassoma; inflammasome; inflammatory reaction; jararagina; MCP-1; muscle cell; resposta inflamatória
- Language: Português
- Abstract: A lesão tecidual é um dos efeitos locais descritos nos envenenamentos botrópicos. Toxinas isoladas, como: a jararagina (JAR) e bothropstoxina-I (BthTX-I), obtidas dos venenos de B. jararaca e B. jararacussu, respectivamente, induzem intensa resposta inflamatória e lesão tecidual, porém apresentam diferentes mecanismos de ação. Como descrito, a resolução da lesão tecidual envolve a interação entre mecanismos de reparo do tecido e o sistema imune. Neste contexto, a resposta inflamatória é iniciada por meio da detecção de sinais de dano tecidual agudo devido a distúrbios da homeostasia resultantes ou não de agentes microbianos (DAMPs) e/ou por reconhecimento de padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs). Uma vez induzida, a resposta inflamatória está envolvida tanto no processo de lesão visando a eliminação do agente indutor, assim como no reparo tecidual. Diversos receptores estão envolvidos no reconhecimento de PAMPs e DAMPs como os transmembrânicos representados pelos do tipo Toll, e os citosólicos que compreendem complexos proteicos que formam os inflamassomas. Estes complexos multiproteicos citosólicos podem participar da indução da resposta imune inata por ativação de caspase-1 com consequente liberação de IL-1β, que pode resultar em morte celular. Considerando o exposto, o objetivo deste trabalho foi estudar a participação de inflamassoma na resposta inflamatória no tecido muscular de injeção das toxinas, a capacidade da BthTX-I e JAR de induzir a ativação deinflamassoma em macrófagos e os mecanismos moleculares envolvidos nesse processo. O estudo da migração de neutrófilos e macrófagos para o músculo gastrocnémio de animais C57BL/6 ou deficientes em caspase 1/11 (Caspase 1/11-/-) ou NLRP3 (NLRP3-/-) injetados com JAR e BthTX-I permitiu verificar que o inflamassoma NLRP3 participa da migração destas células inflamatórias para local de injeção das toxinas. A análise da produção de IL-1β nas culturas de macrófagos peritoneais incubados com JAR e BthTX-I (6 e 24h) mostrou que somente a BthTX-I foi capaz de induzir a secreção desta citocina por um mecanismo dependente de caspase 1/11, ASC e NLRP3 e independente de IPAF. A incubação de macrófagos humanos com as toxinas permitiu verificar que ambas as toxinas induziram a secreção de IL-1β dependente de caspase 1, porém esta produção foi significativamente maior em resposta à BthTX-I. Nos macrófagos peritoneais de camundongos observamos a relação entre a secreção de IL-1β e morte celular em ensaio de incorporação do brometo de etídio nas culturas incubadas com BthTX-I por 24 h e não com a JAR. Visto que ambas as toxinas injetadas via intramuscular induzem resposta inflamatória intensa, foi analisado o efeito delas sobre a viabilidade e secreção de IL-6 e MCP-1 em miotubos C2C12. Os resultados mostraram que somente a BthTX-I induz efeito miotóxico sobre esta linhagem celular. Além disso, pudemos verificar que BthTX-I induz altos níveis de IL-6 e MCP-1 quando comparados aosobtidos com a JAR. Visto que a BthTX-I induziu alta secreção de MCP-1 pelos miotubos C2C12, em experimento in vivo realizado em camundongos C57BL/6 ou deficientes em CCR2 (CCR2-/-) pode ser observada a dependência da interação entre MCP-1 e o CCR2 para a migração dos macrófagos em resposta a injeção de BthTX-I. Em culturas de miotubos incubados com as toxinas pôde ser observada alta liberação de ATP induzida pela BthTX-I in vitro. Em outros experimentos foi estudada a capacidade do sobrenadante de miotubos incubados com BthTX-I de induzir a secreção de IL-1β pelos macrófagos in vitro. Os resultados mostraram a produção de IL-1β nessas culturas de macrófagos, assim como a produção desta citocina em macrófagos incubados com BthTX-I juntamente com ATP. A hidrólise do ATP no sobrenadante da cultura de C2C12 estimulada com BthTX-I aboliu a secreção de IL-1 pelos macrófagos in vitro. Além disso, foi observada a inibição da produção de IL-1β nas culturas de macrófagos primados com LPS e incubados com a BthTX-I em condições de altas concentrações de KCl sugerindo papel relevante do efluxo de K+ na produção de IL-1β induzida pela BthTX-I. Em conjunto, os resultados acrescentam novas informações sobre o potencial inflamatório da JAR e BthTX-I, quanto à ação destas toxinas em macrófagos, ativação de inflamassoma e células musculares
- Imprenta:
- Data da defesa: 16.07.2018
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ABNT
SILVA, Priscila de Andrade Ranéia e. Estudo da ativação de inflamassoma por toxinas isoladas de venenos botrópicos e modulação da resposta imune. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-23042019-135832/. Acesso em: 21 maio 2024. -
APA
Silva, P. de A. R. e. (2018). Estudo da ativação de inflamassoma por toxinas isoladas de venenos botrópicos e modulação da resposta imune (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-23042019-135832/ -
NLM
Silva P de AR e. Estudo da ativação de inflamassoma por toxinas isoladas de venenos botrópicos e modulação da resposta imune [Internet]. 2018 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-23042019-135832/ -
Vancouver
Silva P de AR e. Estudo da ativação de inflamassoma por toxinas isoladas de venenos botrópicos e modulação da resposta imune [Internet]. 2018 ;[citado 2024 maio 21 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-23042019-135832/
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