Sistematização de um método de análises quantitativas para a diferenciação hematopoética de células-tronco embrionárias humanas in vitro (2019)
- Authors:
- Autor USP: COQUEIRO, IGOR LOPES - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: BIOCIÊNCIAS; HEMATOLOGIA; CÉLULAS-TRONCO
- Keywords: Célula-tronco hematopoética; Células-tronco embrionárias; Diferenciação hematopoética; Embryonic stem cell; Hematology; Hematopoietic differentiation; Hematopoietic stem cell; High-content screening
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: As células-tronco e progenitores hematopoéticos (CTPH) são capazes de reconstituir todo o sistema sanguíneo de um indivíduo adulto e por isso apresentam um grande potencial terapêutico. Por muito tempo as células-tronco embrionárias humanas (CTEh) têm sido estudadas como fonte de CTPH in vitro. No entanto a transferência dessa tecnologia para a clínica ainda é um grande desafio. Parte disso se deve às limitações técnicas dos protocolos de diferenciação in vitro que impedem a sistematização de estudos funcionais em larga escala de genes e fatores implicados na regulação deste processo. Nesse sentido a realização de análises quantitativas de diferente condições experimentais poderiam contribuir na compreensão dos mecanismos envolvidos no comprometimento de CTEh com a linhagem hematopoética. Para isso o presente trabalho propõe estabelecer um método de análise da diferenciação hematopoética de CTEh por um conjunto de abordagens de microscopia quantitativa conhecida como High-content screening (HCS). Utilizamos as linhagens de CTEh H1 e H9-GFP para induzir a diferenciação hematopoética em um sistema de cultivo em monocamada em microplacas de 96 poços utilizando um meio indutor quimicamente definido. Utilizamos marcadores envolvidos no processo de transição epitélio mesênquima (TEM) e marcadores hematopoéticos para a realização de ensaios de imunofluorescência que foram analisados por HCS. Em nosso ensaios vimos que a inibição seletiva da enzima GSK3β por 24 h já causa alterações morfológicas significativas nas colónias de CTEh. As análises por HCS revelaram que até o 4° dia de diferenciação a família de fatores de transcrição Snail coordena a TEM das CTEh regulando negativamente os riiveis de E-caderina ao passo que os níveis de N-caderina são aumentados. Nesse momento fomos capazes de formar um endotélio hemogênico in vitro decélulas CD34+ no qual emergem células progenitoras hematopoéticas CD34+CD43+ que progressivamente perdem sua assinatura endotelial à medida que se comprometem com a linhagem hematopoética até adquirir o marcador CD45 no 12° dia de diferenciação. Nossos dados sugerem que o presente método de análise consiste em um modelo operativo de grande valia para a realização de screenings funcionais em larga escala para o estudo dos estágios iniciais da hematopoese humana
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2019
- Data da defesa: 07.05.2019
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ABNT
COQUEIRO, Igor Lopes. Sistematização de um método de análises quantitativas para a diferenciação hematopoética de células-tronco embrionárias humanas in vitro. 2019. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2019. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19092019-130133/. Acesso em: 20 maio 2024. -
APA
Coqueiro, I. L. (2019). Sistematização de um método de análises quantitativas para a diferenciação hematopoética de células-tronco embrionárias humanas in vitro (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19092019-130133/ -
NLM
Coqueiro IL. Sistematização de um método de análises quantitativas para a diferenciação hematopoética de células-tronco embrionárias humanas in vitro [Internet]. 2019 ;[citado 2024 maio 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19092019-130133/ -
Vancouver
Coqueiro IL. Sistematização de um método de análises quantitativas para a diferenciação hematopoética de células-tronco embrionárias humanas in vitro [Internet]. 2019 ;[citado 2024 maio 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19092019-130133/
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