Efeitos da toxina reengenheirada de <i>Bacillus anthracis</i> (PA-U2-R200A + PA-L1-I210A + LF) em osteossarcoma canino: estudos <i>in vitro</i> (2019)
- Authors:
- Autor USP: FONSECA, JONATHAN MACKOWIAK DA - EP/IB/ICB/IQ/Butant /IPT
- Unidade: EP/IB/ICB/IQ/Butant /IPT
- Sigla do Departamento: Botecnologia
- Assunto: xxx
- Keywords: Apoptose; Apoptosis; Neoplasia; Neoplasm; Osteosarcoma; Osteossarcoma; Toxin; Toxina
- Language: Português
- Abstract: O osteossarcoma é o tipo mais comum de câncer ósseo em cães e em seres humanos. Os osteossarcomas caninos representam um modelo único para o estudo desse tipo de câncer em humanos, devido a incidência relativamente alta, semelhanças no comportamento biológico, na apresentação clínica e características moleculares. Novas terapias seletivas para tratamento de diferentes tipos de neoplasias estão sendo testadas e algumas com resultados animadores. Uma dessas possíveis terapias seletivas é a que utiliza a toxina do Bacillus anthracis modificada geneticamente para que seja citotóxica apenas em tecidos com grande expressão de metaloproteinases (MMPs) e ativadores de plasminogênio do tipo uroquinase (uPA), que estão associadas ao crescimento tumoral e metástase. O objetivo desse estudo foi analisar a resposta de uma linhagem de osteossarcoma canino (D17) e uma linhagem de osteossarcoma humano (MG63) à toxina reengenheirada do Bacillus anthracis, testando, assim, uma possibilidade terapêutica para osteossarcomas. Comparamos as duas linhagens de osteossarcoma com uma linhagem de osteoblastos caninos não neoplásicos (COBS), estabelecida por nosso grupo. Para tanto, inicialmente, avaliou-se, a capacidade de expressão de MMPs e uPA em 21 casos de osteossarcoma canino, com os quais se construiu um bloco único de Microarranjos Teciduais (Tissue Microarrays ou TMA) e nas linhagens de osteossarcoma canino utilizadas nesse trabalho. Em seguida, a toxina modificada de Bacillus anthracis(LF+PAL1/PAU2) foi aplicada nas linhagens de osteossarcomas canino D17 e humano MG63 e na linhagem COBS, nas concentrações de 5, 15, 49, 155, 494, 1571 e 5000ng/ml. A viabilidade celular foi avaliada por meio da técnica de MTT. Realizamos também a análise de ciclo celular por citometria de fluxo (FACSCalibur - Becton & Dickinson) para a identificação de apoptose ou necrose após os tratamentos com a toxina. Estudou-se, ainda, a capacidade de migração das células D17 e MG63 em ensaio de wound healing após o tratamento com a toxina. Observamos a expressão de MMP2 em 47% e uPAR em 62% dos 21 casos de osteossarcoma em TMA. Verificamos que as duas linhagens de osteossarcoma apresentaram a expressão de MMPs e uPA, possibilitando que a toxina reengenheirada do Bacillus anthracis tivesse o efeito seletivo. O teste de citotoxicidade mostrou, após 24 horas, que as duas linhagens de osteossarcoma foram sensíveis à toxina do Bacillus anthracis em diferentes concentrações (1571 e 5000ng/ml para MG63 e 5, 15, 49, 155, 494, 1571 e 5000ng/ml para D17, na fração terapêutica da toxina LF+PAL1/PAU2). Identificou-se, por citometria de fluxo, com células marcadas com iodeto de propídeo, que houve predominância de células hipodiploides, indicando que a morte celular ocorreu por apoptose. A migração das células das duas linhagens de osteossarcoma, em ensaio de wound healing, foi menor após o tratamento de 24 horas com a toxina. Por fim, observamos que as duas linhagens deosteossarcoma apresentaram, no ensaio de imunofluorescência, a expressão de β -catenina, MAPK, K-RAS, c-Myc, p53, conexina 43; quanto a Bcl-2, apenas a linhagem MG63 apresentou positividade. Como conclusão, demostrou-se que a toxina reengenheirada do Bacillus anthracis exerceu efeitos antineoplásicos em linhagens de osteossarcomas canino e humano, determinando nestas células morte por apoptose. A toxina do Bacillus anthracis apresentou também citotoxicidade para a linhagem COBS, apenas nas maiores concentrações, determinando parada no ciclo celular em G1. Concluímos dizendo que este foi um estudo pioneiro em osteossarcomas caninos e humanos, pois a toxina reengenheirada do Bacillus anthracis não havia sido testada nessas neoplasias até o presente. Essa toxina mostrou ser um potencial tratamento promissor para o osteossarcoma e possivelmente para alguns tipos de tumores sólidos que expressam metaloproteinases e uroquinases e merece mais investigação e desenvolvimento
- Imprenta:
- Data da defesa: 17.06.2019
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ABNT
FONSECA, Jonathan Mackowiak da. Efeitos da toxina reengenheirada de <i>Bacillus anthracis</i> (PA-U2-R200A + PA-L1-I210A + LF) em osteossarcoma canino: estudos <i>in vitro</i>. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-11112020-100808/. Acesso em: 28 abr. 2024. -
APA
Fonseca, J. M. da. (2019). Efeitos da toxina reengenheirada de <i>Bacillus anthracis</i> (PA-U2-R200A + PA-L1-I210A + LF) em osteossarcoma canino: estudos <i>in vitro</i> (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-11112020-100808/ -
NLM
Fonseca JM da. Efeitos da toxina reengenheirada de <i>Bacillus anthracis</i> (PA-U2-R200A + PA-L1-I210A + LF) em osteossarcoma canino: estudos <i>in vitro</i> [Internet]. 2019 ;[citado 2024 abr. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-11112020-100808/ -
Vancouver
Fonseca JM da. Efeitos da toxina reengenheirada de <i>Bacillus anthracis</i> (PA-U2-R200A + PA-L1-I210A + LF) em osteossarcoma canino: estudos <i>in vitro</i> [Internet]. 2019 ;[citado 2024 abr. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-11112020-100808/ - O crescimento cístico renal é o principal determinante para o desenvolvimento de hipertensão e déficit de concentração em camundongos com deficiência do gene Pkd1
- Efeitos da toxina reengenheirada de <i>Bacillus anthracis</i> (PA-U2-R200A + PA-L1-I210A + LF) em osteossarcoma canino: estudos <i>in vitro</i>
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