Expressão do fator estimulador de colônia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em sistema Pichia pastoris e otimização do bioprocesso (2017)
- Authors:
- Autor USP: ARCHANGELO, BRUNA SAMHAN - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 604
- Subjects: BIOPROCESSOS; NEUTRÓFILOS; CÉLULAS MIELOIDES; FARMACOLOGIA; CUSTOS DE MEDICAMENTOS; LEVEDURAS
- Keywords: Central composite design; Delineamento composto central; Delineamento experimental; Experimental design; G-CSF; Pichia pastoris; Plackett-Burman; Screening design
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O fator estimulador de colônias de granulócito humano (hG-CSF) atua principalmente promovendo a maturação dos neutrófilos. Tem sido utilizado no tratamento de diversas patologias, sobretudo em neutropenias provocadas por eventos que suprimem a produção de células mieloides. No Brasil, este medicamento está inserido no Programa de Assistência Farmacêutica do SUS como medicamento excepcional, porém a um altíssimo custo para aquisição, pois ainda não é produzido no Brasil. Um estudo de viabilidade técnico-econômica da implantação da produção de rhG-CSF no Brasil demonstrou que esse medicamento pode ser produzido por custos até cerca de 90% inferiores aos valores pagos em compras governamentais. Este trabalho mostra a clonagem e expressão do rhG-CSF em sistema heterólogo de P. pastori e visou estabelecer os melhores parâmetros para a indução e produção da mesma em diferente condições de cultivo, além de uma caracterização da linhagem produtora. A construção do plasmídeo de expressão foi feita com o vetor pPICZαA e confirmada por sequenciamento nucleotídico. Após a transformação em P. pastoris, algumas colônias foram testadas para avaliar as condições da expressão da proteína recombinante. A colônia que apresentou uma expressão melhor foi escolhida a produção da proteína recombinante em uma escala maior. A detecção da proteína recombinante foi realizada por SDS-PAGE, Western Blotting e Dot Blotting. O planejamento Plackett-Burman foi aplicado para selecionar as variáveis significantes, que foram o pH e a adição de Sorbitol e aminoácidos no meio de cultura. Os dados obtidos passaram por análise estatística que permitiu esta seleção. O Delineamento Composto Central foi aplicado para uma análise em níveis maiores das variáveis significativas. Também foi feita uma caracterização de linhagem para que a colônia selecionada fossecaracterizada como uma linhagem produtora. Apesar das três variáveis terem sido significativas (pH, sorbitol e aminoácidos), apenas o aumento do valor de pH apresentou um efeito benéfico para a produção da rhG-CSF. Curvas de crescimento celular foram desenhadas, além do cálculo da velocidade máxima de crescimento e tempo de duplicação. Estes resultados mostram a produção da rhG-CSF em P. pastoris e estes são os primeiros passos para uma estratégia de tornar o Brasil um produtor deste biofármaco futuramente, além de contribuir para estudos de otimização de bioprocessos
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2017
- Data da defesa: 24.07.2017
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ABNT
ARCHANGELO, Bruna Samhan. Expressão do fator estimulador de colônia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em sistema Pichia pastoris e otimização do bioprocesso. 2017. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2017. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23112017-101039/. Acesso em: 12 jun. 2024. -
APA
Archangelo, B. S. (2017). Expressão do fator estimulador de colônia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em sistema Pichia pastoris e otimização do bioprocesso (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23112017-101039/ -
NLM
Archangelo BS. Expressão do fator estimulador de colônia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em sistema Pichia pastoris e otimização do bioprocesso [Internet]. 2017 ;[citado 2024 jun. 12 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23112017-101039/ -
Vancouver
Archangelo BS. Expressão do fator estimulador de colônia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em sistema Pichia pastoris e otimização do bioprocesso [Internet]. 2017 ;[citado 2024 jun. 12 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23112017-101039/
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