Seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes humanos contra galectina-3 por eletroforese capilar associada à técnica Phage Display (2019)
- Authors:
- Autor USP: TINOCO, GUILHERME JULIATTO MOLINA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- DOI: 10.11606/D.60.2019.tde-23032022-145945
- Subjects: ELETROFORESE CAPILAR DE ZONA; CLONAGEM; BIOLOGIA MOLECULAR
- Keywords: Capillary electrophoresis; Eletroforese capilar; Galectin-3; Galectina-3; Phage display
- Language: Português
- Abstract: A galectina-3 (Gal-3) é uma proteína multifuncional presente em diversos processos fisiológicos e patológicos incluindo desenvolvimento tumoral, metástase e insuficiência cardíaca. Uma das ferramentas disponíveis para o estudo dessas proteínas é a técnica Phage Display, que proporciona a expressão de uma biblioteca combinatória de fragmentos de anticorpo expressa na superfície de bacteriófagos e a seleção de unidades capazes de se ligar a um determinado alvo. Essa última etapa, ou seja, a seleção de unidades é denominada de panning e apresenta limitações como possibilidade de selecionar alvos inespecíficos, dificuldade de utilizar proteínas alvos de baixa massa molecular e rotina excessivamente trabalhosa e longa. Assim, neste trabalho foi utilizada a eletroforese capilar (EC), uma técnica de separação compatível com análise de proteínas e vírus, no desenvolvimento de um método para seleção de fragmentos de anticorpos específicos para a Gal-3 no contexto da tecnologia de Phage Display. Inicialmente, amostras de Gal-3 foram expressas em culturas de E. Coli e purificadas em coluna de afinidade sepharose-alfa-lactose. Em seguida as proteínas foram analisadas por EC e as seguintes condições foram escolhidas: eletrólito de corrida Tris-HCl 50mM pH 6,8, Tensão 20kV, 18ºC, aditivo trietilamina 4mM, concentração de Gal-3 50 µg/mL, 1psi de injeção por 10 segundos, capilar de 30cm com revestimento interno PVA. Em seguida, a amostras de Gal-3 foram incubadas com a biblioteca de fragmentos de anticorpos fusionados a bacteriófagos e separados em EC com as mesmas condições, utilizando os mesmos princípios do panning clássico, porém com a inclusão de uma técnica analítica de separação. Após a incubação com a biblioteca, foi observada com 8 minutos de análise a migração do complexo [Gal-3+Fago], que foi coletado e amplificado com sucesso. Apesar de mais estudos serem necessários para comprovar a possibilidadeda técnica analítica de EC ser utilizada como uma ferramenta alternativa ao panning tradicional, esse trabalho revelou um potencial promissor dessa prática, que pelas características da EC poderá contribuir com seletividade e rapidez
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2019
- Data da defesa: 18.12.2019
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
TINOCO, Guilherme Juliatto Molina. Seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes humanos contra galectina-3 por eletroforese capilar associada à técnica Phage Display. 2019. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2019. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-23032022-145945/. Acesso em: 04 maio 2024. -
APA
Tinoco, G. J. M. (2019). Seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes humanos contra galectina-3 por eletroforese capilar associada à técnica Phage Display (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-23032022-145945/ -
NLM
Tinoco GJM. Seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes humanos contra galectina-3 por eletroforese capilar associada à técnica Phage Display [Internet]. 2019 ;[citado 2024 maio 04 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-23032022-145945/ -
Vancouver
Tinoco GJM. Seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes humanos contra galectina-3 por eletroforese capilar associada à técnica Phage Display [Internet]. 2019 ;[citado 2024 maio 04 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-23032022-145945/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.60.2019.tde-23032022-145945 (Fonte: oaDOI API)
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