Efeito da edição gênica e modulação da expressão de MIR146B no câncer de tiroide (2021)
- Authors:
- Autor USP: INEZ, DANIEL CASARTELLI DE SANTA - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMC
- DOI: 10.11606/D.42.2021.tde-15122022-100429
- Subjects: NEOPLASIAS DA TIREOIDE; MICRORNAS; EXPRESSÃO GÊNICA; ONCOGENES; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO; CÉLULAS CULTIVADAS DE TUMOR; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; PLASMÍDEOS; CAMUNDONGOS
- Keywords: Anaplastic thyroid cancer; Câncer anaplásico de tiroide; CRISPR/Cas; CRISPR/Cas; Edição gênica; Gene editing; MicroRNA; MicroRNA; miR-146b; miR-146b
- Language: Português
- Abstract: MicroRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não codificantes que regulam a expressão de mRNAs alvo e são comumente desregulados no câncer. No câncer de tireoide, miR-146b é o miRNA mais superexpresso, estando associado à oncogênese e agressividade tumoral, levando à características clínicas e patológicas de pior prognóstico. Desta forma, visamos compreender o papel de miR-146b em um modelo agressivo de câncer de tireoide usando a metodologia de edição genica CRISPR/Cas9n. A linhagem KTC2 (carcinoma anaplásico humano) que expressa um alto nível de miR-146b foi cotransfectada com plasmídeos pSp-Cas9n-miR-146b-guiaA-puromicina e pSp-Cas9n-miR-146b-guiaB-GFP, contendo RNAs guia projetados para flanquear a região do precursor de miR-146b, impedindo a formação do pré-miR. Após a transfecção, foram selecionados dois clones, KTC2-Cl1 e KTC2-Cl3, e uma linha celular controle, KTC2-CTR, cotransfectada com ambos os plasmídeos sem RNA guia. Após a seleção dos clones e confirmação da edição de MIR146B pelo sequenciamento da região alvo, a expressão de miR-146b foi analisada por qPCR a partir do RNA total extraído, e seguida de ensaios de contagem celular, viabilidade, migração, formação de colônias e xenotransplante em camundongos imunossuprimidos. As linhagens KTC2 Cl1 e Cl3 apresentaram diminuição na expressão de miR-146b em relação ao controle, apresentando também redução na proliferação, viabilidade celular, migração e formação de colônias. E ainda, no experimento de xenotransplante, não houve crescimento tumoral das células KTC2-Cl1, injetadas no flanco de camundongos nude. Dessa forma, a modulação da expressão de miR-146b por edição genica utilizando CRISPR/Cas9n mostrou-se eficiente e constitui uma ferramenta molecular para o entendimento do papel dos miRNAs no câncer de tireoide
- Imprenta:
- Data da defesa: 08.12.2021
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- Cor do Acesso Aberto: gold
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ABNT
INEZ, Daniel Casartelli de Santa. Efeito da edição gênica e modulação da expressão de MIR146B no câncer de tiroide. 2021. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-15122022-100429/. Acesso em: 01 maio 2024. -
APA
Inez, D. C. de S. (2021). Efeito da edição gênica e modulação da expressão de MIR146B no câncer de tiroide (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-15122022-100429/ -
NLM
Inez DC de S. Efeito da edição gênica e modulação da expressão de MIR146B no câncer de tiroide [Internet]. 2021 ;[citado 2024 maio 01 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-15122022-100429/ -
Vancouver
Inez DC de S. Efeito da edição gênica e modulação da expressão de MIR146B no câncer de tiroide [Internet]. 2021 ;[citado 2024 maio 01 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-15122022-100429/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.42.2021.tde-15122022-100429 (Fonte: oaDOI API)
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