Caracterização estrutural e funcional de três enzimas com potencial uso biotecnológico da rota biossintética D-manose/L-galactose do ácido L-ascórbico de Myrciaria dubia \"camu-camu\" (2023)
- Authors:
- Autor USP: SANTILLAN, JHON ANTONI VARGAS - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FCI
- DOI: 10.11606/D.76.2023.tde-30032023-113047
- Subjects: CRISTALOGRAFIA ESTRUTURAL; VITAMINA C; ENZIMAS; ESPINAFRE; CAMU-CAMU
- Keywords: Myrciaria dubia "camu-camu."; Biossíntese de vitamina C; Biosynthesis of vitamin C; Cinética enzimática; Crystallographic structure; Enzymatic kinetics; Estrutura cristalográfica; Spinafre
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh, conhecida como camu-camu ou araçá dagua, é uma fruta nativa da Amazônia, caracterizada por seu alto teor de L-Ácido Ascórbico (Vitamina C ou AsA). Devido a esta propriedade, as enzimas que participam da biossíntese de AsA poderiam ter potenciais aplicações biotecnológicos para a produção artificial de AsA. No entanto, a biologia estrutural das enzimas envolvidas tem sido bem pouco explorada. Aqui, descrevemos as propriedades biofísicas, funcionais e estruturais para três enzimas da via D-manose/L-galactose (Smirnoff & Wheeler). As enzimas foram purificadas por cromatografia de afinidade e exclusão molecular. GDP-D-manose-3,5-epimerase (MdGME), que catalisa uma dupla epímerização da GDP-manose para produzir GDP-L-galactose e GDP-L-gulose, provou ser um dímero em solução, suas estruturas cristalográficas foram resolvidas complexadas, sua forma apo (2,5 Å, ligada a NAD^[+]) e holo (1.25 Å ligada a NAD^[+]/substrato/produto). A L-galactose desidrogenase (MdGDH) e L-galactono-1,4lactona desidrogenase (MdGalDH) provaram ser monoméricas em solução. MdGDH apresentou uma atividade catalítica com um Km de 0,128 mM e pH ótimo de 7. Demostramos que a inibição por AsA em MdGDH é devido a mudanças no pH e não necessariamente por uma inibição competitiva pelo sítio ativo como foi reportada para a enzima homóloga de espinafre (SoGDH). A estrutura cristalográfica de SoGDH foi resolvida a 1,4 e 1,75 Å em suas formas apo e holo (ligado aNAD^[+]), respectivamente. Finalmente a MdGalDH apresentou uma atividade catalítica com um K^[m] de 0,044 mM e pH ótimo de 8 e apresentou uma inibição pelo próprio substrato. A estrutura cristalográfica foi resolvida a 2,1 Å. O presente trabalho contribui para uma compreensão mais amplo das relações estrutura-função das enzimas envolvidas na síntese da vitamina C
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2023
- Data da defesa: 26.01.2023
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo é de acesso aberto
- URL de acesso aberto
- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
-
ABNT
VARGAS SANTILLAN, Jhon Antoni. Caracterização estrutural e funcional de três enzimas com potencial uso biotecnológico da rota biossintética D-manose/L-galactose do ácido L-ascórbico de Myrciaria dubia \"camu-camu\". 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76133/tde-30032023-113047/. Acesso em: 27 abr. 2024. -
APA
Vargas Santillan, J. A. (2023). Caracterização estrutural e funcional de três enzimas com potencial uso biotecnológico da rota biossintética D-manose/L-galactose do ácido L-ascórbico de Myrciaria dubia \"camu-camu\" (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76133/tde-30032023-113047/ -
NLM
Vargas Santillan JA. Caracterização estrutural e funcional de três enzimas com potencial uso biotecnológico da rota biossintética D-manose/L-galactose do ácido L-ascórbico de Myrciaria dubia \"camu-camu\" [Internet]. 2023 ;[citado 2024 abr. 27 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76133/tde-30032023-113047/ -
Vancouver
Vargas Santillan JA. Caracterização estrutural e funcional de três enzimas com potencial uso biotecnológico da rota biossintética D-manose/L-galactose do ácido L-ascórbico de Myrciaria dubia \"camu-camu\" [Internet]. 2023 ;[citado 2024 abr. 27 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76133/tde-30032023-113047/ - Genomic analysis and biochemical profiling of an unaxenic strain of Synechococcus sp. isolated from the Peruvian Amazon Basin region
- Caracterização estrutural e funcional de três enzimas com potencial uso biotecnológico da rota biossintética D-manose/L-galactose do ácido L-ascórbico de Myrciaria dubia \"camu-camu\"
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- Caracterização estrutural e funcional de três enzimas com potencial uso biotecnológico da rota biossintética D-manose / L-galactose do ácido L-ascórbico de Myrciaria dubia "camucamu"
- Structural and functional characterization of three key enzymes in the biosynthesis of vitamin C from Myrciaria dubia
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- Estudos estruturais e bioquímicos de 10 enzimas com possível atividade de PET hidrolase oriundas de metagenoma antártico
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Informações sobre o DOI: 10.11606/D.76.2023.tde-30032023-113047 (Fonte: oaDOI API)
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