Efeitos de um inibidor de Rho kinase (ROCK) sobre células gliais de Müller potencial utilização para tratamento de membranas epirretinianas (2023)
- Authors:
- Autor USP: RODA, VINICIUS MORAES DE PAIVA - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMC
- DOI: 10.11606/D.42.2023.tde-24082023-134818
- Subjects: BIOLOGIA CELULAR; RETINA; MEMBRANAS CELULARES; CITOESQUELETO; MICROTÚBULOS; IMUNOFLUORESCÊNCIA; EXPRESSÃO GÊNICA; FIBRONECTINAS; ACTINAS
- Keywords: células de Müller; epiretinal membrane; membrana epirretiniana; Müller glial cells; retina; retina; ROCK; ROCK
- Language: Português
- Abstract: A membrana epirretiniana é um tecido fibrocontrátil que se forma na superfície interna da retina, podendo causar desde uma deficiência visual até o descolamento da retina. As células gliais de Müller participam ativamente da formação desta membrana. Atualmente, há uma busca por novas abordagens terapêuticas que visam prevenir ou tratar as disfunções celulares envolvidas na progressão desta fibrose. A via de sinalização das GTPases Rho está envolvida na regulação de vários processos celulares que podem ser associados à membrana, como proliferação, migração e contração celulares. Em especial, a enzima Rho quinase (ROCK), efetora da GTPase RhoA, é um potencial alvo terapêutico a ser investigado. Este estudo tem como principais objetivos avaliar, em células de Müller humanas, os efeitos de um inibidor de ROCK (Y27632) sobre a viabilidade, crescimento, organização do citoesqueleto, expressão de componentes da matriz extracelular, diferenciação em miofibroblastos, migração e contratilidade. Para isso, células da linhagem MIO-M1 foram cultivadas e tratadas por diferentes períodos com o inibidor. A viabilidade foi avaliada por ensaio com 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide (MTT) e pelo método de exclusão com azul de tripan. O crescimento foi avaliado por curva de crescimento e por ensaio de incorporação de BrdU. O citoesqueleto de actina foi evidenciado com faloidina fluorescente, enquanto filamentos intermediários e microtúbulos foram avaliados por imunofluorescência para vimentina e -tubulina.A expressão gênica e proteica de colágenos I e V, laminina e fibronectina foi avaliada por rt-PCR e imunofluorescência. A migração celular direcionada e espontânea foi estudada por ensaio em câmara bipartite e por observação de células vivas em microscopia de contraste de fase, respectivamente. A contratilidade celular foi avaliada por ensaio de contração em gel de colágeno. Os resultados mostraram que a inibição de ROCK com Y27632 não alterou a viabilidade e diminuiu o crescimento e a proliferação celular após 72 h. Houve alteração da morfologia celular e da organização da actina filamentosa (F-actina), com redução do corpo celular, desaparecimento de fibras de estresse e formação de prolongamentos celulares longos e ramificados. O citoesqueleto de microtúbulos e filamentos intermediários também foi alterado, possivelmente como consequência de alterações da F-actina. O inibidor também reduziu a expressão gênica e imunorreatividade de -actina de músculo liso, um marcador de miofibroblastos. A expressão de componentes da matriz extracelular não foi afetada pelo inibidor. A migração celular direcionada também não foi alterada, embora a contratilidade celular tenha sido substancialmente reduzida. Não foi observada migração espontânea de células MIO-M1. Em conclusão, a inibição farmacológica de ROCK em células de Müller sugere que esta pode ser uma abordagem potencial interessante no tratamento de membranas epirretinianas, prevenindo a proliferação, contratilidade e transdiferenciação dessas células, sem alterar a viabilidade celular
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- Data da defesa: 03.03.2023
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- Cor do Acesso Aberto: gold
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ABNT
RODA, Vinicius Moraes de Paiva. Efeitos de um inibidor de Rho kinase (ROCK) sobre células gliais de Müller potencial utilização para tratamento de membranas epirretinianas. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-24082023-134818/. Acesso em: 30 abr. 2024. -
APA
Roda, V. M. de P. (2023). Efeitos de um inibidor de Rho kinase (ROCK) sobre células gliais de Müller potencial utilização para tratamento de membranas epirretinianas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-24082023-134818/ -
NLM
Roda VM de P. Efeitos de um inibidor de Rho kinase (ROCK) sobre células gliais de Müller potencial utilização para tratamento de membranas epirretinianas [Internet]. 2023 ;[citado 2024 abr. 30 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-24082023-134818/ -
Vancouver
Roda VM de P. Efeitos de um inibidor de Rho kinase (ROCK) sobre células gliais de Müller potencial utilização para tratamento de membranas epirretinianas [Internet]. 2023 ;[citado 2024 abr. 30 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-24082023-134818/ - Do anti-VEGFs used in the ophthalmic clinic cause Mu euro ller glial cell stress?
- Lack of AnxA1 exacerbates systemic inflammation but negatively regulates retinal gliosis in diabetic retinopathy
- Cellular components of the idiopathic epiretinal membrane
- Inhibition of Rho kinase (ROCK) impairs cytoskeletal contractility in human Müller glial cells without effects on cell viability, migration, and extracellular matrix production
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.42.2023.tde-24082023-134818 (Fonte: oaDOI API)
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